为获得山羊副流感病毒3型F蛋白，设计引物RT-PCR扩增山羊副流感病毒3型F蛋白基因，通过酶切克隆入pFastBacHTB中，经PCR、酶切和测序鉴定正确的阳性重组质粒pF-F转化DH10Bac，经蓝白菌落筛选，挑取白色菌落提取Bacmid，将PCR鉴定正确重组的Bacmid (rBac-F) 转染Sf9 昆虫细胞，连续传代获得重组杆状病毒,观察细胞病变情况并采用PCR鉴定目的基因的存在。通过Western blot鉴定重组蛋白的表达。这将为进一步研究该病毒F 蛋白的功能及CPIV3疫苗和诊断方法的研究提供基础和材料。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言4
1 材料与方法4
1.1 材料 4
1.2 方法4
1.2.1 病料RNA提取4
1.2.2 PIV F引物设计4
1.2.3 PIV F基因扩增4
1.2.4重组供体质粒的构建5
1.2.5重组杆状病毒质粒的构建5
1.2.6重组杆状病毒的获得6
1.2.7重组PIV F蛋白的表达6
1.2.8重组杆状病毒的PCR鉴定7
2 结果与分析7
2.1 PIV F基因片段RTPCR扩增7
2.2 重组转移载体质粒的鉴定 8
2.3 重组Bacmid质粒BacF的鉴定 8
2.4重组病毒的获得与重组蛋白的Western blot鉴定9
2.5重组杆状病毒的PCR鉴定9
3 讨论10
致谢10
参考文献11
表达山羊副流感病毒3型F蛋白的重组杆状病毒的构建

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