猪圆环病毒2型（porcine circovirus 2，PCV2）是猪场常见的重要致病病原之一，可导致断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）等疾病并破坏机体免疫系统，且存在多种亚型，建立完善的PCV2分型方法有助于PCV2共感染情况的研究及疫苗研发。本研究针对PCV2d亚型开放阅读框2（open reading frame 2，ORF2）设计Taqman荧光定量引物及探针，建立Taqman荧光定量PCR检测及分型方法。PCR扩增出完整的PCV2d ORF2片段连接pMD19-T载体构建重组质粒标准品，成功建立出荧光定量PCR PCV2d分型法标准曲线。对临床98份病料用PCR进行PCV2检测及分型，得到41.38% PCV2b（12/29）与58.62% PCV2d（17/29）。将新建方法应用于此批临床样可得PCV2b、PCV2d样品CT值有明显差异（P=0.00023），TaqMan real-time PCR方法具有PCV2分型参考价值。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 3
1.1 材料、试剂及仪器 3
1.2 引物与TaqMan探针的设计 3
1.3 重组质粒标准品的制备 3
1.4 TaqMan realtime PCR方法的建立 4
1.5 98份临床样品分型检测 4
2 结果与分析 4
2.1重组质粒标准品的制备与鉴定 4
2.2 TaqMan realtime PCR方法的建立 5
2.3 TaqMan realtime PCR标准曲线建立 5
2.4 TaqMan realtime PCR重复性、敏感性、特异性的检测 6
2.5 临床样品的检测 6
3 讨论 9
致谢： 10
参考文献： 10
附录 12
猪圆环病毒2型荧光定量检测与分型方法的建立及其应用

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