检测沙门菌抗体试剂盒特异性试验研究
目录
摘要1
关键词1
Abstract 1
Key words 1
引言（或绪论）1
1 材料与方法1
1.1 材料2
1.1.1 实验材料2
1.1.2 主要试剂2
1.1.3 ELISA试剂盒试剂的配制2
1.1.4 主要仪器2
1.2 方法3
1.2.1 沙门菌抗体的检测3
1.2.2 细菌冻干粉活化、复壮3
1.2.3 细菌计数3
1.2.4 细菌疫苗的制备4
1.2.5 灭活4
1.2.6 免疫前操作4
1.2.7 免疫4
1.2.8 血常规检测4
1.2.9 人工白细胞分类计数4
1.2.10 免疫后兔血清抗体效价测定4
1.2.11 抗体效价的计算5
1.2.12 检测沙门菌抗体试剂盒的特异性5
1.2.7.1间接ELISA操作规程5
2 结果与分析5
2.1 沙门菌抗体的检测结果5
2.2 实验兔的免疫记录表5
2.3 白细胞分类计数结果6
2.3.1 镜检下的中性粒细胞形态特征6
2.3.2 镜检 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072$
下的淋巴细胞形态特征6
2.3.3 镜检下的单核细胞形态特7
2.3.4 镜检下的嗜酸性细胞形态特征7
2.3.5 镜检下的嗜碱性粒细胞形态特征8
2.3.6 不同细胞计数方法对细胞计数的影响8
2.3.7 免疫前后对细胞计数的影响9
2.4 免疫后一周兔血清抗体效价测定12
2.5 沙门菌试剂盒特异性检测结果13
3 讨论14
3.1 关于ELISA检测方法中的相关问题14
3.2 鞭毛蛋白H抗原14
3.3 影响抗体水平的因素14
致谢14
参考文献15
检测沙门菌抗体试剂盒特异性试验研究
引言
沙门菌（Salmonella）是一种在于自然界中广泛存在的革兰阴性细菌，依靠鞭毛运动，不产生芽孢，有的含荚膜，属于肠杆菌科沙门菌属[1]。目前，沙门菌已报道超过两千余种血清型，种类复杂且多样。它是一种重要的动物性病原菌，还是一种常见的食源性致病菌，对畜牧养殖行业和食品卫生安全构成极大的威胁[2]。因此，加强对沙门菌的快速准确检测是保障畜禽生产安全和食品安全必需且有效的手段。
1977年，Krysinski和Heimsch[3]首次将ELISA方法应用于食品中沙门菌的检查，经过多年的深入研究，现在已经成为了沙门菌检查中最常用的免疫检测手段。使用ELISA方法检测沙门菌抗原时，其灵敏度可以达到105～106 CFU/mL[4]。ELISA方法测定沙门菌的基本原理是[5]：把特异性的沙门菌株的抗体（抗原）包被在固体基质上，然后加入待测样品和酶标抗原（抗体），二者发生特异性反应后，形成抗原抗体复合物，未结合的成分通过洗涤被除去，接着加入酶的反应底物，底物被酶催化而呈现一定的颜色，根据颜色的有无以及深浅对样品进行定性或定量测定。较高的特异性和灵敏度，可用于快速检测是ELISA检测方法的优点。
沙门菌ELISA抗体检测方法所用的检测抗原主要集中在O抗原和H抗原上。其中，O抗原是沙门菌脂多糖（LPS）上的侧链多糖，具有种属特异性。H抗原是鞭毛抗原，具有良好的免疫原性。肖星星等人[6]针对鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的fliC、f1jB基因进行了原核表达及纯化，通过优化表达条件，鞭毛蛋白fliC和f1jB均以可溶性表达。
目前，以鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白fljB为抗原建立的间接ELISA方法研究较少。根据兽用免疫诊断试剂盒试验研究技术指导原则[7]，特异性一般是用对已知无病动物的阴性率来表示。对抗体检测试剂盒，应通过检测与目标疾病存在交叉反应的相关病原免疫的动物血清或自然感染血清的交叉反应来确定。本试验旨在研究以经过纯化的鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白fljB为抗原建立的间接ELISA检测沙门抗体试剂盒的特异性，为日后试剂盒的临床应用奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验材料 15只普通级日本大耳兔，雌性，重约2.2～2.6kg，健康，没有发生过腹泻等疾病，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于中国农业大学动物医学院试验动物房。
大肠杆菌(CVCC1450)、普通变形杆菌(CVCC1971)、单增李斯特菌（CVCC1599）细菌冻干粉，购于中国兽医微生物菌种保藏中心。
1.1.2 主要试剂
表1 培养基及试剂
Table 1 Culture media and reagents
主要试剂
购自公司
BHIA 脑心浸液琼脂培养基
北京陆桥技术股份有限公司
BHI 脑心浸液肉汤
北京陆桥技术股份有限公司
LA琼脂培养基
北京陆桥技术股份有限公司
LB营养肉汤
北京陆桥技术股份有限公司
原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/dwyx/57488.html
热门阅读
