通过重组表达的方法获得无乳链球菌裂解酶PlyGBS0643三个结构域的重组蛋白，确定其发挥主要作用的关键结构域，为改造裂解酶提供理论基础。本试验设计无乳链球菌裂解酶PlyGBS0643三个结构域0643-FlgJ、0643-MurNac-Laa、0643-LysMR的上下游引物，以无乳链球菌GD201008-001强毒菌株的基因组为模板，通过PCR扩增获得目的基因，并将它们定向克隆至载体pET28a中，完成重组构建后，测序鉴定正确。将重组载体导入到BL21细胞中，用IPTG低温诱导表达，尽量使蛋白表达在上清。结果显示0643-FlgJ/pET28a重组质粒表达的蛋白在上清，纯化后的浓度为3 mg/mL。用纯化的0643-FlgJ/pET28a重组质粒表达的蛋白做细菌裂解实验，即使浓度达到300 μg/mL裂解效果不明显（实验室之前的研究结果显示lysGBS0643的最佳浓度为30 μg/mL），证明0643-FlgJ不是主要的酶活结构域，推测MurNAc-LAA是起主要的酶活结构域。0643-MurNac-Laa/pET28a重组质粒表达的蛋白，更换了各种条件均在包涵体中表达，蛋白没有活性，尝试将其目的基因克隆至载体PcoldII，成功构建0643-MurNac-Laa/Pcold II质粒，但是没有表达蛋白；同时，0643-LysMR-GFP表达的蛋白可结合无乳链球菌的细胞壁，证明0643-LysMR是结合结构域。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言（或绪论）2
1 材料与方法3
1.1 菌株和质粒 3
1.2 主要材料与仪器 3
1.3 获取目的基因3
1.4 获取pET28a质粒4
1.5 PCR 产物和质粒双酶切5
1.6连接与转化 5
1.7 PCR电泳鉴定及测序鉴定 6
1.8 提取重组质粒、转化、检测PCR 6
1.9诱导表达 6
1.10 SDSPAGE分析 6
1.11大剂量表达蛋白 7
1.12纯化蛋白 7
1.13蛋白超滤 8< *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
br /> 1.14酶活性分析 8
1.15裂解酶细胞壁结构域的功能分析 8
2 结果与分析 9
2.1各个重组质粒转化至DH5α的核酸电泳结果 9
2.2各个重组质粒测序结果 10
2.3蛋白表达产物的SDSPAGE电泳检测结果 10
2.4酶活性分析结果 11
2.5裂解酶细胞壁结构域的功能分析结果 12
3 讨论 12
致谢 13
参考文献 13
无乳链球菌裂解酶PlyGBS0643关键结构域的分析

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