和缓艾美耳球虫内生性发育的研究
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1卵囊2
1.1.2 实验动物2
1.2方法 2
1.2.1卵囊的扩增2
1.2.2实验动物分组方法2
1.2.3孢子化卵囊的感染及鸡的饲养2
1.2.4鸡只处死方法2
1.2.5鸡肠道样品的采集2
1.2.6肠道样品制片染色及观察3
1.2.7肠道组织DNA提取3
1.2.8肠道组织PCR扩增3
1.2.9肠道组织PCR鉴定4
2 结果与分析4
2.1肠道抹片观察结果4
2.2肠道组织切片观察结果7
2.3肠道组织PCR鉴定结果10
3讨论 13
致谢13
参考文献13
和缓艾美耳球虫内生性发育的研究
引言
鸡球虫病是养鸡业中常见的寄生虫疾病[1]，经常带来巨大的经济损失。其中的和缓艾美尔球虫（Eimeria mitis）属于致病力较弱的一类 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072^
艾美耳球虫。相关文献表明，单独低剂量感染和缓艾美耳球虫并不会引起明显的肉眼病变，而当大量感染和缓艾美耳球虫时会影响鸡增重[2]，降低饲料转化率，并产生明显的病理变化[3]。在自然条件下，鸡群往往会发生和缓艾美耳球虫与其它病原微生物的混合感染，并引起严重的病理变化[4]。
和缓艾美耳球虫最早是由Tyzzer在对一混合柔嫩艾美耳球虫感染的鸡中发现的[5]。目前和缓艾美耳球虫的内生性发育和具体寄生部位还没有一个确定的答案[6]。但综合来看，和缓艾美耳球虫主要是寄生在回肠、盲肠和直肠[7]，但在其内生发育的早期整个肠道都可能感染，尤其是临近卵黄囊的肠道感染会更严重[8]。
在我国，和缓艾美尔球虫分布很广[9]。但对和缓艾美耳球虫的研究却很少。可能因为和缓艾美耳球虫的形态大小与堆型艾美耳球虫相似[10]，其本身的致病力也较一般的球虫弱，所以以往常用的鉴定方法均不能起到很好的作用[11]。而当和缓艾美耳球虫与其他球虫混合感染时，和缓艾美耳球虫所引起的细微的肠道病理变化经常被其他球虫引起的病理变化及病症掩盖[12]。
研究和缓艾美耳球虫内生性发育及寄生部位不仅会给和缓艾美耳球虫的诊断带来许多方便，也是虫种鉴定工作的基础[13]。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 卵囊
和缓艾美耳球虫孢子化卵囊（大学动物医学院兽医寄生虫学科组已分离，并经过鉴定，纯化及保存）。
1．1．2 实验动物
两周龄海兰白雏公鸡60只。
1．2 方法
1．2．1 卵囊的扩增
1）实验前将收集卵囊所用工具（如离心杯、漏斗等）煮沸消毒。
2）在鸡粪加入纯净水，搅拌均匀，使粪液能顺利流过筛孔（不能过稀）。
3）过滤已搅拌均匀的粪液于入离心杯中，平衡每个离心杯的重量。
4）平衡后的离心杯置于低速大容量离心机离心（4000r/min）8min。
5）弃去上清，于离心杯中加入少量食盐，先倒入50mL饱和食盐水，充分搅拌，再倒入50mL饱和食盐水充分搅拌，平衡每个离心杯的重量。
6）将平衡后的离心杯置于低速大容量离心机离心（4000r/min）8min。
7）蘸取少量于显微镜下镜检，若观察到的虫卵数较少，弃去上清液，重复第5步、第6步。
8）当镜检到的虫卵数较多时，将上清液倒入干净的瓶中，加水稀释，确保可离心两次，配平每个离心杯的重量。平衡后的离心杯置于低速大容量离心机离心（4000r/min）8min。
9）弃去离心杯中的上清，先加入10mL2.5%重铬酸钾溶液，充分搅拌，再加入5mL重铬酸钾，确保无卵囊残留后倒入容器内，置入28℃温箱中孵育。
10）第二天观察孢子化情况。当孢子化率达到80%时，置4℃冰箱中保存。
1. 2. 2 实验动物分组方法
试验雏鸡分为三组，分别为实验感染1组、实验感染2组和空白对照组，每组20只鸡。
1．2．3 孢子化卵囊的感染及鸡的饲养
实验感染1组和实验感染2组中的鸡分别经口感染5×104个和缓艾美耳球虫孢子化卵囊，于空白对照组的鸡经口注入同等剂量的生理盐水。确保空白对照组与实验感染组的鸡不被其他球虫感染。
1．2．4 鸡只处死方法
窒息致死。
1．2．5 鸡肠道样品的采集
实验感染组的鸡感染后于29、36、48、60、70、72、76、88、90、96、100、108、125、144、168、192、216、240小时后，分别剖杀一只实验感染1组、一只实验感染2组和一只空白对照组的鸡，打开腹腔并取出全部肠道。分别对三只鸡的十二指肠、卵黄囊憩室前10cm肠段、卵黄囊憩室后5cm肠段、盲肠盲端、直肠处取样12cm肠管。
实验感染1组和空白对照组的肠管样品用PBS缓冲液冲洗数次，冲洗干净管腔，置于10%多聚甲醛小瓶中固定，置于4℃冰箱中以备制片染色。
原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/dwyx/57461.html
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