：甜菜碱具有调控机体生长和改善机体代谢的功能，而鸡蛋内本身含有一定量的甜菜碱，但是鸡蛋内甜菜碱是怎样对雏鸡的生长发育起调控作用的目前还不清楚。本实验以如皋黄鸡为实验对象，研究在种母鸡日粮中添加0.5%的甜菜碱对子代生长发育的影响。研究发现，母鸡饲喂甜菜碱促进了鸡的产蛋性能，提高了产蛋量，但是却抑制了子代雌性鸡的生长，甜菜碱组子代雌性鸡在7，14，21，28，35，42日龄的体重都显著低于对照组（P < 0.05）,而雄性鸡体重却没有显著差异。相应的胰岛素样促生长因子（IGF-1）的基因表达水平在甜菜碱组的雌性鸡中表达显著下降（P < 0.05），在雄性鸡中无变化（P > 0.05）。同时我们也检测了蛋氨酸循环中的几个关键酶的蛋白表达水平，发现腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶（AHCY）的表达量在甜菜碱组雏鸡中均表达升高（P < 0.05），但是甲硫氨酸腺苷基转移酶（MAT）只在甜菜碱组的雄性鸡中表达升高（P < 0.05），雌性无变化（P > 0.05）。同时研究发现，母鸡饲喂甜菜碱促进了蛋内皮质酮含量的升高（P < 0.05）。这些研究结果表明，母鸡饲喂甜菜碱促进了母鸡的产蛋性能，却抑制了子代雌性鸡的生长发育。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验试剂 2
1.2仪器和设备 3
1.3实验动物分组及处理3
1.4实验方法和观测指标3
1.4.1血液生化指标3
1.4.2蛋白免疫印迹3
1.4.3基因表达检测4
2结果与分析4
2.1母鸡生长和生产性能4
2.2子代生长发育 5
2.3基因表达7
2.4蛋白表达7
3讨论7
致谢8
参考文献9
母鸡饲喂甜菜碱对子代生长发育的影响
引言
我国是畜牧生产和消费大国，禽类产品的饲养量和消费量在世界上一直占据着重要的地位。在现代化集约生产中，如何提高动物的生产性能一直是主要的生产问题。甜菜碱广泛存在于动植物体内，是一种无毒害
 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072# 
作用的饲料添加剂，广泛应用于食品及化工领域[1]。随着对甜菜碱应用的不断推广，研究发现在鸡日粮中添加甜菜碱可以促进脂肪代谢并改善肉质[2]、缓解应激[3]、提高抗球虫能力[4]、促进生长和提高生产性能[5]。甜菜碱又名三甲基甘氨酸，有两个主要的生物学作用，一个作为渗透调节剂参与渗透保护作用，另一个是作为甲基供体，参与蛋氨酸循环，节约机体对蛋氨酸的利用，促进蛋白质的合成以及促进动物的生长。但是目前关于甜菜碱对于动物机体的生长调控主要限于当代饲喂，而母体饲喂甜菜碱能否通过蛋内沉积来调控子代的生长发育还是未知的。
动物机体的生长发育受到遗传性和非遗传性因素的双重调节。就后者而言，母体效应对子代的影响近年来逐渐受到重视。母体效应是指子代畜禽的某些外貌特征、生理性状和生产性能受其母本直接影响的一种生理现象。这种改变不仅受自身遗传基础的影响，还与环境因素导致的表遗传有关。表遗传修饰主要包括DNA甲基化、组蛋白甲基化及组蛋白乙酰化等。研究发现母体在妊娠的不同时期，其营养水平会改变胚胎的内分泌环境并对子代的生理性状和行为造成一定的影响[6, 7]。贾逸敏等人的研究发现母猪妊娠期添加甜菜碱可以显著提高新生仔猪的体重[8]。李茜等人研究发现母猪妊娠期饲喂甜菜碱可以通过DNA甲基化促进新生仔猪海马的增殖[9]。而在禽类中，母鸡产蛋后会将胚胎生长发育所必须的营养物质沉积在蛋内，也会沉积其他的物质如抗体、RNA和激素。此后，母体与胚胎不再有直接的物质交换和信息交流[10]。先前，胡云等人研究报道，蛋内注射甜菜碱模拟母体效应可通过表遗传改变肝脏的胆固醇代谢[11]，但是母鸡饲喂能否在子代有相应的表遗传效应还是未知的。
动物的生长发育受神经内分泌生长轴的调控，即“下丘脑－垂体－靶器官”途径，胰岛素生长因子（IGF1）和生长激素（GH）处于生长轴的中心环节，GH是调节动物生长的关键因素，IGF1是由GH介导的生长因子，IGF1能够直接促进细胞的生长，增加机体对氨基酸的摄取与利用，促进蛋白质和RNA的合成，增加肌肉的生长，还可以与其他生长因子协同促进成骨细胞、脂肪细胞和胶质细胞的增殖与分化，对动物生长发育起着重要的调控作用。先前研究发现在猪饲料中添加甜菜碱可以促使血清中的生长激素（GH）水平上升42102%，相应的胰岛素样生长因子水平能升高3975%[12]。体外实验研究发现甜菜碱处理能够上调小鼠成纤维细胞中IGF1受体的表达，促进骨骼肌肌纤维的分化和增加肌小管大小[13]。在禽类中同样发现饲喂甜菜碱可以显著提高肉鸭血液中GH和IGF1的含量[14]。这些研究表明动物的生长发育与IGF1的表达有一定的相关性。而关于母体饲喂甜菜碱对子代动物IGF1的影响目前鲜有报道，其机制更是不清楚。
因此。本研究用如皋黄鸡作为动物模型来研究母鸡饲喂甜菜碱对子代鸡生长发育的影响。首先，在饲养过程中我们发现母鸡饲喂甜菜碱可以显著提高了母鸡的产蛋性能，但是却使得雌性子代的体重显著低于对照组，而雄性却未受到影响。其次，在分子水平上检测了蛋氨酸循环代谢中关键酶的蛋白表达水平和生长调控相关的IGF1的基因表达水平。本文通过阐述母鸡饲喂甜菜碱对子代鸡生长发育的影响，并揭示其相应的调控机制，从而为禽类健康生长和饲料添加剂的应用上提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1．1 实验试剂
蛋白质电泳缓冲液：Tris 2.72 g、Glycine 18.8 g、10%SDS 10 mL,加双蒸水定容至1 L，pH = 8.3。
蛋白质印迹转印缓冲液：Tris 3.03 g、Glycine 14.4 g、甲醇20%，加双蒸水定容至1 L。
蛋白质印迹洗膜液TBST：Nacl 8.8 g、15 mol/L Tris 0.2 L、吐温20 1 mL，加双蒸水定容至1 L。
封闭液：用TBST配制终浓度为5%脱脂奶粉溶液。
总蛋白质裂解液（RIPA buffer）：10 mM氯化钾、1.5 mM氯化镁、10 mM Hepes pH = 7.9、1 mMDTT、1 mM leupeptin、1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride以及1x Protease inhibitor Cocktail 蛋白酶抑制剂。
TRIzol试剂购自于Life Science公司；蛋白质表达检测中所用BCA总蛋白测定试剂盒（Pierce@BCA Protein Assay Kit Thermo）和化学发光检测试剂盒（PIERCE Super Signal West Pico Trial Kit）购自于南京生兴生物技术公司；蛋白酶抑制剂（Roche Complete EDTAfree）购自于罗氏公司。组织总胆固醇酶法测定所用试剂来自北京普利莱基因技术有限公司；胰岛素样生长因子Ⅰ检测所用试剂购自于北京北方生物研究所。反转录试剂盒购自南京诺唯赞生物科技有限公司。
1．2 仪器和设备
离心机：贝克曼（Optima L80 XP，Beckman，USA）
蛋白质印迹成像仪：VersaDoc4000MP，BioRad,USA

原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/dwyx/51136.html