为有效改善菜籽粕营养价值，提高菜籽粕在畜禽生产中的应用，本实验通过利用本实验室自行分离，保存的猪源乳酸杆菌与果胶酶进行菌酶协同发酵菜籽粕，研究菌酶协同发酵对菜籽粕营养物质的影响；减少菜籽粕中的抗营养因子的含量并改善其营养特性，提高菜籽粕的饲用价值。采用实验室自行分离的三株猪源乳酸杆菌（植物乳酸菌L47、罗伊氏乳酸杆菌L45、约氏乳酸杆菌L63）与果胶酶发酵菜籽粕，并优化酶解条件。结果显示菌酶协同营养物质含量提高，同时大量降解如粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、半纤维素和硫代葡萄糖苷等抗营养因子，切实有效的提高了菜籽粕饲用价值。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料及设备 2
1.2 化学指标测定方法3
1.2.1 常规指标测定3
1.2.2 硫葡萄糖苷的测定3
1.2.3 乳酸检测试剂盒测定乳酸量3
1.2.4 乳酸菌活菌数的测定：涂布平板法3
1.2.5 可溶性还原糖的测定：二硝基水杨酸比色法4
1.2.6 半纤维素、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的测定：滤袋法（ANKOM 2000i）4
1.3 酶解条件优化4
1.3.1 果胶酶酶解菜籽粕方法 4
1.3.2 果胶酶最适添加量确定4
1.3.3 酶解时间对还原糖转化率的影响4
1.3.4 底物浓度对还原糖转化率的影响4
1.3.5 pH值对还原糖转化率的影响4
1.3.6 温度对还原糖转化率的影响4
1.4 猪源乳酸杆菌与果胶酶协同发酵对菜籽粕营养物质的影响4
1.4.1 乳酸杆菌接种液的制备[7]4
1.4.2 菌酶协同处理菜籽粕的方法5
1.4.3 菌酶协同发酵菜籽粕对照实验5
1.5 数据统计及分析5
2 结果与分析5
2.1 酶解条件的优化5
2.1.1 果胶酶最适添加量5
2.1.2 酶解时间对还原糖转化率的影响6 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^351916072^ 

2.1.3 底物浓度对还原糖转化率的影响6
2.1.4 pH值对还原糖转化率的影响7
2.1.5 温度对还原糖转化率的影响7
2.2猪源乳酸杆菌与果胶酶协同发酵对菜籽粕营养物质的影响8
2.2.1 酶解和发酵对菜籽粕pH的影响8
2.2.2 酶解和发酵对菜籽粕乳酸含量的影响8
2.2.3 酶解和发酵对菜籽粕还原糖的影响9
2.2.4 酶解和发酵对菜籽粕乳酸菌活菌数的影响9
2.2.5 酶解和发酵对菜籽粕其他营养物质的影响10
3 讨论10
3.1 果胶酶酶解工艺优化10
3.2 猪源乳酸杆菌与果胶酶协同发酵对菜籽粕的影响10
果胶酶与乳酸杆菌结合发酵对菜籽粕营养成分的影响
引言
菜籽粕是畜牧生产中常用饲料原料，我国拥有世界第一的菜籽粕产量，菜籽粕中抗营养物质（如硫代葡萄糖苷）限制了菜籽粕在畜禽日粮中广泛应用。研究表明,通过发酵处理菜籽粕可降低其抗营养因子含量,改变菜籽粕营养物质结构,能够有效改善菜籽粕的营养价值[1]。目前菜籽粕生物脱毒法大部分研究集中于通过微生物发酵法降解抗营养因子，已有研究发现通过酶解后进行生物发酵的方式，菜籽粕中抗营养因子的降解程度较之前更高，提高营养物质。目前有研究发现多菌株混合发酵法理论上可以发挥不同菌株的发酵特性，但是多种不同微生物菌株之间存在拮抗效应［2］，而采用菌酶协同发酵，可以提高发酵过程中微生物对饲料中大分子物质利用效率，如纤维素酶水解秸杆生成的单糖能为酵母菌合成菌体蛋白提供能量［3］，进而提高饲料品质。乳酸杆菌作为在自然界中大量存在的益生菌，在畜禽生产中，不仅可以作为抗生素替代品用来调节肠道菌群结构[4]，抑制病原菌[5]以及抗氧化免疫调节[6]，也是发酵饲料常用的发酵菌株。而果胶酶作为纤维降解酶，能够酶解菜籽粕中大量的纤维素同时产生还原糖促进乳酸菌生长发酵。本实验选用乳酸杆菌与果胶酶协同作用，通过发酵、酶解两步法降低菜粕中的抗营养因子硫代葡萄糖苷含量，提高菜粕中蛋白质含量。
实验分为两部分。第一步，酶解条件优化：采用单因素试验，探究酶解时间、底物浓度、pH和温度对酶解效率（还原糖转化率）的影响，确定酶解最佳条件，并探究酶解对菜籽粕纤维的降解情况。第二步，菌酶协同发酵：通过研究猪源乳酸杆菌与果胶酶在菜籽粕中对底物的利用情况（还原糖）以及代谢产物（乳酸）的生成，评价酶解对乳酸杆菌发酵效率的影响；通过探究菜籽粕中营养物质（粗蛋白、粗纤维等）的变化情况，研究酶解和发酵对菜籽粕营养物质的影响。
1 材料与方法
1.1 材料及设备
1.1.1 原料：菜籽粕购于本地市场，粉碎至40目后备用。
1.1.2 发酵菌种：乳酸杆菌接种液（罗伊氏乳杆菌L45，植物乳杆菌L47和约氏乳杆菌L63等比例混合，有效活菌数为109 CFU/mL）。菌株保存与4 ℃
1.1.3 酶：果胶酶
1.1.4 培养基：
MRS培养基：蛋白胨10.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母膏5.0 g、柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7]2.0 g、葡萄糖（C6H12O6H2O）20.0 g、吐温80 1.0 mL、乙酸钠（CH3COONa3H2O） 5.0 g、磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）2.0 g、硫酸镁（MgSO47H2O）0.58 g、硫酸锰（MnSO4H2O）0.25 g、琼脂18.0 g、蒸馏水11000 mL、pH值6.2~6.6；
LB培养基：蛋白胨10g、酵母粉5g、氯化钠10g、水1000ml、pH值7.0。
1.1.5 主要仪器设备：发酵瓶、恒温摇床培养箱、冰箱、离心机、烘干箱、恒温摇床培养箱
1.2 化学指标测定方法
1.2.1 常规指标测定

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