[目的]应激所导致肠道微生物区系的变化是机体腹泻的主要诱因，因此如何维护肠道菌群的稳定，是降低腹泻，减少动物应激造成损失的关键。本实验旨在研究GC与小鼠肠道菌群的互作机制，为经过靶向微生物群干涉改善动物身体健康提供可能性。[方法]建立小鼠应激模型及空白对照，比较各组小鼠体重变化，分析瑞士乳杆菌对应激小鼠体重变化的影响；利用酶联免疫吸附实验检测瑞士乳杆菌对应激小鼠肠内容物中激素皮质醇含量变化的影响；运用荧光定量PCR法检测瑞士乳杆菌对应激小鼠肠道中菌群数量改变的影响；利用气相色谱仪测定瑞士乳杆菌对应激小鼠肠内容物中的挥发性脂肪酸量的变化的影响。[结果]应激会使小鼠体重减轻，瑞士乳杆菌会在一定程度阻止应激小鼠体重的减轻；瑞士乳杆菌使应激小鼠肠道内皮质醇含量显著减少；降低肠道内大肠杆菌的丰度；显著提高应激小鼠肠道中挥发性脂肪酸乙酸/丙酸含量。[结论]瑞士乳杆菌具有维护应激小鼠肠道内微生物区系平衡、保护应激小鼠肠道内分泌平衡的作用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract2
Key words2
引言3
1 材料与方法3
1.1 材料3
1.1.1 实验仪器3
1.1.2 药品与试剂4
1.2 方法4
1.2.1 建立小鼠应激模型及空白对照4
1.2.2 酶联免疫吸附实验检测小鼠肠内容物中激素皮质醇含量5
1.2.3 荧光定量PCR方法检测小鼠肠内容物中细菌DNA含量6
1.2.4 气相色谱仪测定小鼠肠内容物挥发性脂肪酸的含量8
1.2.5 统计学方法9
2 结果与分析9
2.1 瑞士乳杆菌对应激小鼠体重变化的影响9
2.2 瑞士乳杆菌对应激小鼠肠道皮质醇含量的影响9
2.3 瑞士乳杆菌对应激小鼠肠道细菌菌群变化的影响10
2.4 瑞士乳杆菌对应激小鼠肠道挥发性脂肪酸含量的影响11
3 讨论12
参考文献13
致谢14
瑞士乳杆菌对应激小鼠肠道微生物区系的影响
引言
前言
研究表明 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: &351916072& 
，肠道微生物是关系宿主消化代谢、免疫健康的“第二基因组”。应激会对小鼠肠道健康产生很多不良的影响，主要表现为：肠道的通透性有所增加，腹泻率上升[1]，应激导致小鼠肠道微生态易受致病感染，尤其是革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）[2]，肠道内的蛋白质和氨基酸产胺被致病菌获取，黏膜被胺刺激，造成黏膜的分泌量增加，食糜通过的速度将会被加快，导致外毒素和内毒素的吸收，肠内压增高，造成渗透性腹泻的症状；肠道紧密连接蛋白的表达量下调，细胞间的Occludin蛋白重新分配[3]；肠道微生物菌群发生改变，有益菌菌群比例下降，而有害菌菌群比例上升等[4]。
有研究表明，动物应激后肠道内乳杆菌相对丰度和微生物多样性均降低，而梭状芽孢杆菌、普雷沃菌和兼性厌氧菌（如大肠杆菌）的相对丰度升高[58]。肠道微生物多样性的降低使构成黏液层的葡聚糖更容易被病原微生物利用[9]。同时也有研究表明，动物应激后第1周时消化道乳杆菌和肠杆菌比值下降可能是导致腹泻率增高的直接原因[10]。现在，微生物学研究证明了动物机体肠道微生物组的正常组成及其在炎症性肠病(IBD)环境中的扰动，这种改变的微生物组或“生物失调”是IBD炎症长期发展的关键因素[1112]。另一方面，致病菌感染能够刺激机体糖皮质激素的分泌。例如大肠杆菌脂多糖提高了小鼠血清中的皮质醇含量。这说明，GC对肠道微生物区系的影响是互相的。
肠道菌群作为一种机体内的环境因素，也参与调控了应激反应过程中的代谢过程。一些需氧或厌氧微生物，如双歧杆菌，可以在一定程度上消除血液中因GC含量升高而产生的有害影响[13]。Alverdy等（1991年）发现外源性GC可以增加成年大鼠盲肠和粪中革兰氏阴性菌的数量[14]。Sudo等（2004年）对无菌小鼠进行束缚应激干预，发现皮质酮激素水平较SPF级小鼠明显升高，而在定植了正常小鼠肠道菌群后，这种异常的激素水平得到了纠正[15]。Unsal等（2008年）用不同剂量的地塞米松处理大鼠48小时后发现，5mg/kg剂量的地塞米松显著提高了大鼠回肠中需氧菌和乳酸杆菌的数量[16]。以上数据表明，GC可以使肠道菌群结构或位置发生改变。
综上，应激所导致肠道微生物区系的变化是机体腹泻的主要诱因，因此如何维护肠道菌群的稳定，是降低腹泻，减少动物应激造成损失的关键。
瑞氏乳杆菌经过发酵后，其中检测出了多种生物活性肽，具有增强机体免疫、调控激素水平、抑制酶活性、抵抗致病菌、抗病毒和増强机体新陈代谢等作用。可以缓解动物机体的精神紧张，改善大脑功能、提高学习能力、增强记忆力[1718]。
肠道菌群提供了治疗性干预的新路径，是目前应激性疾病研究的新靶点。本实验利用小鼠应激模型建立、小鼠肠道内容物检测等方法，研究GC与肠道菌群的互作机制，为通过靶向微生物群干预和构建改善机体健康提供可能性。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1仪器
UVVis Spectrophotometer Q5000(Quawell)
赛多利斯天平（sartorius）
7890B气相色谱仪（Agilent Technologies）
7500 Real Time PCR System
微孔板清洗机
基础酶联酶标仪
SHZB水浴恒温振荡器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）
GTR101低速冷冻离心机（北京时代北利离心机有限公司）
Tiss24多样品组织研磨机（净信科技有限公司）
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