猪链球菌和大肠杆菌是临床中重要的人畜共患病原，不仅对养殖业造成巨大损失，同时对人类健康造成风险。因为抗菌药物的广泛使用，两种细菌的耐药率也逐年上升，对临床感染治疗带来巨大挑战。大蒜素对病原微生物有一定的抑菌活性，但其与其它抗生素联用是否对上述两种耐药菌株产生协同或相加作用，尚未确定。本实验采用CLSI推荐的微量两倍稀释法测定了大蒜素、头孢噻呋和恩诺沙星对分离的84株猪链球菌和223株大肠杆菌的最小抑菌浓度（MIC）；然后各选择34株耐药菌株，以微量稀释棋盘法测定了大蒜素联合头孢噻呋和恩诺沙星对所选菌株的联合抑菌效果。同时，采用扫描电镜观察了大蒜素对大肠杆菌细胞膜的影响。结果显示猪链球菌和大肠杆菌对头孢噻呋耐药率分别为2.2%和58.39%；对恩诺沙星的耐药率分别为88.60%和30.04%；大蒜素对大肠杆菌和猪链球菌的MIC范围分别为4-16 μg/mL和16-128 μg/mL。大蒜素与头孢噻呋和恩诺沙星联用后，对猪链球菌抑菌活性增强，相加效果占91.18%，但对大肠杆菌作用不显著。扫描电镜结果显示大蒜素在一定浓度下对大肠杆菌细胞膜有一定影响，对其抗菌机制有待进一步研究。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 2
1 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.1.1 菌株 2
1.1.2主要耗材和仪器 2
1.1.3主要培养基配制 3
1.1.4主要药品及试剂配制 3
1.2 方法 4
1.2.1菌悬液配制 4
1.2.2微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度 4
1.2.3联合抑菌—棋盘法 4
1.2.4扫描电镜观察大蒜素对大肠杆菌细胞膜的影响 6
2 结果与分析 6
2.1头孢噻呋和恩诺沙星对大肠杆菌和猪链球菌的敏感性 6
2.2大蒜素对大肠杆菌和猪链球菌的敏感性测定 8
2.3 大蒜素联合头孢噻呋和恩诺沙星对大肠杆菌和猪链球菌的联合抑菌作用 9
2.4 联合抑菌结果 11
2.5扫描电镜观察不同浓度大蒜素对大肠杆菌细胞膜的影响 11 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^351916072^ 

3 讨论 12
3.1 大蒜素研究意义 12
3.2 大肠杆菌耐药现状以及用药选择 12
3.3 猪链球菌耐药现状以及选择用药 13
致谢 13
参考文献： 14
大蒜素与其他抗菌药对猪链球菌和大肠杆菌的联合抗菌活性测定
引言
大蒜属于百合科葱属植物蒜的鳞茎、味辣、性温，在我国种植广泛，目前主要作为调味品广泛应用于食品行业。对大蒜及其提取物进一步研究发现，该类物质在医药和畜禽、水产养殖等行业具有广泛的应用前景[1, 2]。研究表明大蒜中所含的抗菌成分大蒜辣素 (Allicin) ，又名大蒜新素，目前也有类似合成物，主要成分为二烯丙基三硫化物，但其毒性强于天然大蒜素[3]。大蒜具有多种功能，对不同的病毒、细菌、真菌等病原微生物有很大程度的抑制消灭作用，同时能预防及抑制癌症肿瘤的生长，被称为“天然抗生素”[46]。
猪链球菌作为一种重要的人畜共患病原菌，不仅对世界各地养猪业的发展造成威胁，带来巨大的经济损失，同时相关从业人员也面临感染该病的风险[7]。该病感染猪可造成猪产生败血症、脑膜炎、关节炎和淋巴结炎等症状，感染人也可导致败血症、脑膜炎，严重者可并发休克甚至死亡。目前世界各养猪业发达国家均有报道猪链球菌病的流行。早于上世纪六十年代末，欧洲首次出现该菌感染人类引发脑膜炎的相关病例[8]。同时猪链球菌病对我国养猪业和相关从业人员也造成了巨大的威胁。上世纪末，江苏地区大规模暴发的2型猪链球菌病疫情不仅给养猪业造成重创，同时相关人员的感染发病进一步为防治该病敲响警钟[9]。2005年四川省资阳县相继发生了人感染猪链球菌病例，造成数十人感染发病死亡[10]。猪链球菌病的预防可以通过接种减毒疫苗或灭活疫苗来实现，但由于该菌血清型复杂，且同血清型毒力也不尽相同，因此仅靠疫苗对防治猪链球菌病十分有限，目前临床上对猪链球菌发病采取的主流治疗手段是抗生素治疗。大肠埃希氏菌(E. coli)可引起畜禽局部或全身性感染，具有较高的发病率和死亡率，尤其肠外致病性大肠杆菌引起的脑膜炎、败血症、腹膜炎等造成动物的死亡率极高，且该菌群耐药性及其严重，极大地威胁着畜禽养殖、人类健康、食品安全等，是近年来报道较多的一类重要的人兽共患大肠杆菌[1113]。随着抗生素的广泛使用，抗生素在使用上的不规范以及滥用情况日益严重，导致猪链球菌和大肠杆菌对抗生素耐药情况日益严峻，造成大量耐药菌株的出现，给治疗带来困难。药物残留、食品安全、环境污染等一系列问题也引发广泛关注。因此对猪链球菌和大肠杆菌耐药性监测以及临床合理使用抗菌药物及其重要，寻找相应的抗生素替代品以减少抗生素的使用对延缓耐药性的产生具有重要作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株
研究所使用的大肠杆菌和猪链球菌均为2018年度本实验室从规模化猪场分离、保存的菌株。大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC29213为MIC测定时的质控菌株，购自中国菌种保藏中心。
1.1.2主要耗材和仪器
各种规格EP管、枪头、一次性细菌培养皿、普通PCR八连管、96孔微量稀释板等耗材购于南京拓伦有限公司。试验所需主要仪器设备信息如表1所示。
表1 主要仪器设备
Table1 Main instruments and equipments
仪器名称
厂家
型号
微量天平
北京赛多利斯科学仪器有限公司
BSA224S
电热恒温培养箱
上海森信实验仪器有限公司
GZX9240 MBE
20℃冰柜
青岛海尔股份有限公司
BCD556WDGTU1
超净工作台
苏州安泰空气技术有限公司
SWCJ1FD
各量程微量移液枪
德国eppendorf公司
SHK99II
立压力蒸汽灭菌锅
上海博迅实业有限公司医疗设备厂
BXM30R
高速离心机
德国eppendorf公司
5910R

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