摘要：本研究室早期研发的防治水稻纹枯病的生物农药“纹曲宁”的活性成分——枯草芽孢杆菌Bs916对多种植物病原真菌和细菌都具有抑制作用，可以产生多种脂肽类和聚酮类抗生素。本研究在前期Bs916抑制番茄青枯病菌的基础上，采用植物MS平板定殖研究法、温室盆栽试验及土壤中微生物特异性平板分离检测技术等研究了Bs916在番茄根部的定殖能力、评估了其对番茄青枯病的防治效果和对番茄根围微生物的影响。研究结果表明：生防芽孢杆菌Bs916在番茄根部定殖能力较强，在MS平板中，定殖量可达3.1×107CFU/g根以上。在盆栽试验中，常规土壤中或在接种青枯菌后，番茄根部Bs916的数量都呈现先下降后上升，最后趋于稳定的趋势。Bs916对番茄青枯病的盆栽防效可达55.6%。青枯菌特异性检测培养基检测结果显示，Bs916能够抑制青枯菌在番茄根部吸附和扩展，并阻止青枯菌进入番茄根内，从而降低番茄根部和茎部青枯菌的数量。此外，番茄定植后，Bs916对根围土壤中细菌种群具有先抑制后促进的作用，对真菌具有显著促进作用，而对根围放线菌则无显著影响。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言（或绪论）3
1 材料与方法4
1.1 供试材料 4
1.2 平板对峙实验 4
1.3 Bs916在无菌番茄根部的定殖试验 5
1.4 盆栽定植试验5
1.5 盆栽防效试验5
1.6 番茄根围可培养微生物含量测定5
1.7 数据分析6
2 结果与分析6
2.1 枯草芽孢杆菌Bs916和Bs916G对番茄青枯菌的平板抑制作用6
2.2 枯草芽孢杆菌Bs916在无菌番茄根部定植能力6
2.3 枯草芽孢杆菌Bs916G在盆栽番茄根部定植能力6
2.4 Bs916对番茄青枯病的防效及青枯菌的含量影响7
2.5 枯草芽孢杆菌Bs916对番茄根围土壤中可培养微生物含量影响8
3 讨论 9
参考文献10
图1 6
图2 7
图3 8
图4 8<
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表1 6
枯草芽孢杆菌Bs916在番茄根部的定殖及
对番茄青枯病的防治作用
引言
近年来，设施蔬菜栽培面积迅猛迅速扩大，特别是番茄、辣椒和黄瓜，已成为促进农业稳定发展的新亮点。然而，因设施大棚的密闭性和单一作物重茬连作引起的番茄土传病害（青枯病和枯萎病）频繁暴发，严重制约着设施番茄产业的可持续发展[12]。番茄青枯病（病原为茄青枯劳尔氏菌Ralstonia solanacearum）和枯萎病（病原为尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici）田间发病症状非常相似，青枯病多在番茄开花期间发生，随着坐果及果实膨大，病情逐渐加重，病原菌侵染维管束，阻塞其输送营养物质，病茎纵切面维管束变褐且有菌脓溢出[34]。
目前，生产上主要采用化学药剂分别防治番茄土传青枯病，不仅造成生态环境严重污染，而且直接增加农产品有毒化学物质的残留量，对人类健康带来危害。生物防治对人畜安全、环境兼容性好、病菌不易产生抗药性，因而引起人们的重视，并初见成效。如，番茄青枯病生防菌主要有：无致病力青枯菌、假单孢菌和芽孢杆菌等[57]。研究发现，生防菌防治植物土传病害的先决条件是其在引进位点能够有效定殖[89]。因此，拮抗菌的定殖能力及动态规律研究已经成为生防微生物筛选、研发的重要参考指标之一。
根围拮抗芽孢杆菌可产生强抗逆性的内生芽孢，其抑菌谱广、对多种植物病害具较好防效并对植物具有促生作用。已有研究表明，芽孢杆菌防治植物病害的机制主要有：与病原菌竞争营养和生态位点，分泌抗菌物质抑制病原菌的生长和激发植物诱导系统抗性[10]。江苏省农业科学院植物保护研究所水稻病害与生防研究室经过长期积累，以多种病原菌为指示菌，筛选，积累了大量的生防菌株资源，并进行了相关生防产品的开发，如防治水稻纹枯病的生物制剂“纹曲宁”[1113]和防治水稻细菌性病害的“叶斑宁”等[1415]。
前期研究显示，纹曲宁的主要活性成分——枯草芽孢杆菌Bs916对多种植物病原真菌和细菌都具有抑制作用，如水稻纹枯病菌、水稻细条斑病菌、番茄青枯菌和番茄枯萎病菌等。已有全基因组测序数据和质谱检测结果表明，芽孢杆菌Bs916可以产生多种脂肽类和聚酮类抗生素，如表面活性素、杆菌霉素L，范革素等[1618]。本研究在前期Bs916抑制番茄青枯病菌的基础上，拟采用植物MS平板定殖研究法、温室盆栽试验及土壤中微生物特异性平板分离检测技术，进一步研究Bs916在番茄根部的定殖能力、对青枯病的生防效果和其对番茄根围微生物的影响，旨在全面评估Bs916防治番茄青枯病的效果和其是否具有进一步田间开发的潜在应用价值。
1 材料与方法
1．1 供试材料
试验所用病原细菌番茄青枯菌Ralstonia solanacearum RSQ和生防菌株枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis Bs916及其GFP标记菌株Bs916G均由江苏省农业科学院植物保护研究所水稻病害与生防研究室保存。枯草芽孢杆菌活化和发酵均用改良酵母膏蛋白胨葡萄糖（Yeast peptone glucose，YPG）培养基（酵母膏5 g、胰蛋白胨5 g、葡萄糖5 g、pH 7.0～7.2，固体培养基需加琼脂15g）。菌株Bs916G抗生素使用浓度为，氯霉素（Cm），10μg/ml。番茄青枯病菌用营养琼脂（Nutrient agar，NA）培养基（牛肉浸膏3.0 g、酵母膏1 g、蛋白胨5 g、葡萄糖10 g、蒸馏水1000 mL，固体培养基需加琼脂15 g）活化培养，青枯菌的分离检测采用特异性选择培养基SMSA[19]。试验所用番茄品种为巨粉宝，枯草芽孢杆菌在无菌番茄根部定殖实验采用植物普通组培(Murashige and Skoog，MS)培养基[20]，购自荷兰Duchefa Biochenie公司。
1．2 平板对峙试验
将枯草芽孢杆菌Bs916和Bs916G在YPG固体平板活化，挑取单菌落入YPG液体培养基发酵，在33 ℃、150 r/min震荡培养48h（菌含量：2×109cfu mL1）。番茄青枯病菌在NA固体培养基上活化，移入50 mL NA培养液中，在28 ℃下振荡（150 r/min）培养12 h，吸取青枯菌液涂布空白NA平板（0.2mL菌液/平板，青枯菌含量：108 cfu mL1）。NA平板四周呈十字架型打4个5mm的小孔（离培养皿中心距离约为30mm），每孔上滴入生防菌液5μL。每处理重复3皿。设清水对照。28℃恒温培养，待对照平板长满时调查抑菌圈直径。
1. 3 Bs916在无菌番茄根部的定殖试验

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