摘 要葡萄是我国很多地区的主要水果之一。在近代化的发展过程中,提高葡萄的产量和质量是最重要的问题之一。目前已报道的数百种植物的大多数mirRNA都是用生物信息学方法预测的。可是,与具有起始密码子和终止密码子的基因编码基因相比，miRNA末端没有明显的确定miRNA成熟序列的特征,因此利用生物信息学方无法预测miRNA的成熟体位于前体序列的精准位置，本实验研究了利用miR-RACE生物信息学预测的葡萄的miR156精确序列,通过分析建立了有关研究葡萄的小RNA文库，测试出miRNA中RACE产物的克隆精准序列。结果表明，通过这种有效的新方法证明了葡萄中生物信息学预测的葡萄的miR156精确序列位置。强化研究使用RLM-5RACE方法证明其靶基因切割miR156，以及定量RT-PCR检查确切的序列短语，采取此措施有助于找到精确序列并弥补生物信息学不能预测miRNA在前体上的序列的缺陷，这可能是miRNA研究的一个十分有用的工具。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法3
1.1实验材料 3
1.1.1植物材料 3
1.1.2菌株及载体 3
1.1.3化学试剂、酶制剂及剂 3
1.1.4 培养基及溶液3
1.1.5引物 4
2 实验方法4
2.1小RNA的提取4
2.2小分子RNA定量与完整性检测5
2.3 小 RNA 3¢末端加ploy(A) 5
2.4 ploy（A）小分子RNA 5接头的连接 5
2.5 cDNA第一链的合成6
2.6 miR5 RACE和miR3 RACE扩增 6
2.7 microR156 目的片段的回收 6
2.8 目的片段与载体的连接 7
2.9 目的片段的转化及克隆鉴定 7
2.10荧光定量PCR检测新的miRNA 7
3 结果与分析 8
3.1 葡萄miR5RACE和miR3RACE 8
3.2 葡萄 m *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072# 
iRRACE 扩增产物的克隆序 9
3.3 MiRRACE 验证的葡萄 miRNA保守和变异性析 9
3.4葡萄 miRN156的表达分析10
4 讨论 11
致谢 12
参考文献 12
利用miRRACE确定生物信息学预测的葡萄的vvimiR156精确的序列

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