目录
摘 要 IV
关键词 IV
ABSTRACT V
KEY WORDS V
引言 1
1 材料与方法 1
1.1 试验材料 1
1.2 主要试剂、培养基和仪器 2
1.3 酵母突变体的构建 2
1.3.1 模板DNA的提取 2
1.3.2 引物的设计 2
1.3.3 基因序列的扩增 3
1.3.4 PCR产物的纯化 3
1.3.5 基因序列的敲除 4
1.3.6 敲除基因的诊断 4
1.3.7 菌株的保藏 5
1.4 加富培养 5
1.5 氮饥饿培养 5
1.6 荧光的观察 6
1.7 酵母Snc1与Snc1PEM蛋白的检测 6
1.7.1 细胞破碎 6
1.7.2 蛋白质的提取 6
1.7.3 变性琼脂糖凝胶电泳（SDSPAGE） 6
1.7.4 免疫印迹分析（Western Blot） 7
2 结果与分析 7
2.1 YPD+Ade培养条件使WT1 菌株GFPSnc1呈现稳定的极性分布 7
2.2 atg1Δ突变体菌株GFPSnc1的降解受到抑制 8
2.3 atg1Δ突变体菌株GFPSnc1PEM的降解受到抑制 9
2.4 PEP4敲除对野生型和atg1Δ突变体菌株GFPSnc1(PEM)降解的影响 10
3 讨论 12
3.1 WT1菌株GFPSnc1的极性分布情况与培养条件相关 12
3.2 酿酒酵母质膜蛋白Snc1与Snc1PEM参与细胞自噬的情况分析 12
3.3 酿酒酵母质膜蛋白Snc1与Snc1PEM参与自噬体膜形成的可能性分析 12
致谢 12
参考文献 14
酵母质膜Snc1蛋白在自噬过程中的变化情况
摘 要
细胞自噬是在饥饿等不 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ^351916072* 
利条件下介导受损伤大分子物质或衰老细胞器等底物进行降解与循环利用的保守过程。其主要过程为：由双层膜形成自噬前体包围待降解底物，封口后形成自噬体，自噬体膜与液泡膜发生融合进而将自噬体内的货物降解。本文通过构建突变体、荧光显微镜观察、免疫印迹分析等研究方法，探究酵母质膜蛋白Snc1在自噬过程中的变化情况。根据试验结果与预测结果，YPD+Ade的培养条件可使WT1菌株GFPSnc1呈现较稳定的极性分布，自噬关键基因ATG1和液泡水解酶基因PEP4的敲除会抑制 Snc1与Snc1PEM蛋白（一种内吞缺陷突变蛋白）的降解。这些结果表明，酵母质膜Snc1蛋白与Snc1PEM蛋白在氮饥饿条件下可作为细胞自噬的底物进行降解，进行循环利用。

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