目录
摘要Ⅱ
关键词ⅡAbstractⅢ
引言
引言1
1□材料与方法1
1.1□材料 1
1.1.1□实验所用菌株与载体1
1.1.2□主要溶液配方1
1.1.3□主要使用仪器3
1.2□方法 3
1.2.1□目的基因的获取3
1.2.2□PCR回收4
1.2.3□片段酶切4
1.2.4□目的基因连接表达载体5
1.2.5□重组质粒转化5
1.2.6□提取质粒5
1.2.7□单双酶切检测5
1.2.8□质粒转化C43(DE3) 感受态6
1.2.9□小量诱导表达检测6
1.2.10□蛋白纯化7
2□结果与分析7
2.1□片段及质粒酶切7
2.2□质粒提取8
2.3□重组质粒的酶切鉴定9
2.4□小量诱导表达检测11
2.5□蛋白纯化13
3□讨论14
3.1□全文小结14
3.2□讨论14
致谢14
参考文献15
沙雷氏菌FS14中组氨酸激酶
10125全长及膜外部分的表达纯化
摘 要
本课题研究的沙雷氏菌FS14中的10125是一种组氨酸激酶，而组氨酸激酶是双组分调控系统的一个重要组分。双组分调控系统是细菌的主要的跨膜信号转导系统，帮助细菌适应不断变化的环境。细菌通常运用不同的双组分调节系统来响应特定的信号，并产生适应性反应。随着生命科学在分子水平上的不断深入的研究，各种生命现象也更为人们所熟知。而组氨酸激酶的活化、磷酸化等作用在生命现象中的重要性也越来越重要。本实验采用分子生物学技术，将沙雷氏菌(Serratia sp.)FS14中组氨酸激酶10125全长及膜外部分的编码基因用PCR技术进行扩增，将所获目的片段连接到表达载体中，并将载体转入大肠杆菌C43（DE3）中进行表达，将表达产物进行纯化。获得有活性的目的蛋白，为明确组氨酸激酶的结构与功能奠定了基础。因为疫情原 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: #351916072# 
因未能进一步得到最适合的表达纯化条件，但成功地构建了原核表达载体表达了目的蛋白。
 EXPRESSION AND PURIFICATION OF FULL LENGTH HISTIDINE KINASE 10125 AND ITS SENSORY DOMAIN OF SARRENELLA FS14
ABSTRACT
In this study, 10125 of Serratia marcescens FS14 is a histidine kinase, and histidine kinase is an important component of the twocomponent regulatory system. The twocomponent regulatory system is the main transmembrane signal transduction system for bacteria and helps them adapt to changing environments. Bacteria usually have many different twocomponent regulatory systems that respond to different specific signals and produce adaptive responses. With the development of life science at the molecular level, various life phenomena have become more familiar to people. The activation and phosphorylation of histidine kinases must be paid more attention to. In this experiment, the genes encoding full length and the sensor domain of histidinekinase 10125were amplified by PCR, the target fragments were ligated into the expression vector, and the constructs were then transferred into Escherichia coli C43(DE3) for protein expression, and the expression products were purified.
KEY WORDS： Histidine kinase； Two component regulatory system；Escherichia coli；Prokaryotic expression；protein purification
沙雷氏菌（Serratia sp.）又称灵杆菌，是一种广泛分布于水和土壤等环境及食物中的兼性厌氧菌，能产生非水溶性红色素的革兰氏阴性细菌。一般存在于土壤、水、植物、动物以及人类的肠道和呼吸道中[1]。粘质沙雷氏菌产生的灵菌红素具有多种生物活性，例如抗癌，抗霉，免疫抑制等[57]。
双组分系统是一种跨膜信号转导系统，普遍存在于原核生物及大部分低等真核生物中。双组分信号系统是生物基本的感应外界环境变化，并做出相应反应的调控系统，其主要作用为调控细胞的生长、分化、代谢、趋化、细胞周期变化等生理功能及生物的致病性 、耐药性[2]。因此研究双组分系统对于医疗有重大的意义。

原文链接：http://www.jxszl.com/swgc/smkx/606539.html