目录
摘要Ⅱ
AbstractⅢ
引言1
文献综述2
1 霍乱弧菌的研究进展2
1.1霍乱弧菌概述2
1.2霍乱概述2
2霍乱弧菌的致病机理与毒力因子3
2.1霍乱弧菌致病机理3
2.2霍乱弧菌毒力因子3
3 霍乱弧菌的肠道定殖4
1材料与方法6
1.1材料6
1.1.1供试菌株6
1.1.2 培养基及培养条件6
1.1.3 实验动物...6
1.1.4 实验试剂...6
1.2细菌生长曲线测定...7
1.3成年鼠肠道定殖实验...7
1.4成年鼠肠道竞争性定殖实验...7
1.5细胞因子测定实验.......8
2结果与分析..8
2.1细菌生长曲线测定实验结果...8
2.2成年鼠肠道定殖实验结果...9
2.3细胞因子测定实验结果.....11
3讨论... 14
致谢15
参考文献16
附录一 缩略词18
毒力因子MakA对霍乱弧菌在宿主体内定殖影响的探究
摘 要
霍乱弧菌是引起霍乱的病原体，通过污染的水源感染宿主。其定殖于宿主肠道的过程复杂，受诸多因素影响。通过查阅文献和序列比对找到一个新发现的霍乱弧菌毒力因子MakA，其可能对霍乱弧菌在宿主肠道中的定殖能力有影响，但具体影响与影响机制还未被探究。
本课题通过体外生长曲线的测定证明MakA不影响霍乱弧菌正常的体外生长，成年鼠体内的单独定殖实验证明在无其它菌株竞争时，MakA对霍乱弧菌在宿主体内的定殖无明显影响。通过成年鼠体内的竞争性定殖实验，发现成年鼠体内makA缺失株的定殖数要明显高于野生型，说明makA缺失株相对于野生型在成年鼠体内存在明显的定殖优势，由此证明MakA会阻碍霍乱弧 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: #351916072# 
菌的定殖过程，降低定殖能力。
关于MakA影响霍乱弧菌定殖能力的机制，猜想可能与宿主免疫系统反应强度有关。选择三种与炎症反应以及病原体入侵有关的细胞因子。通过测定小鼠感染后肠道组织中三种细胞因子的水平，比较感染两种菌株的小鼠肠道组织中这三种细胞因子的差异，发现感染makA缺失株的小鼠肠道组织中三种细胞因子的水平均低于感染野生型的小鼠，说明MakA的存在会导致宿主免疫系统更强烈的反应，由此可以证明MakA可能是通过刺激宿主免疫系统，提高免疫反应的强度来影响霍乱弧菌的定殖能力。
引言
霍乱弧菌(Vibrio cholerae)是一种革兰氏阴性菌，多存在于水体中，特别是沿海与河口富含一定盐分的水体中[2]。霍乱弧菌是引起霍乱（cholera）的病原菌。霍乱是一种烈性肠道传染病，其主要症状是剧烈的腹泻，呕吐，致使机体体液与盐分大量流失，血液循环衰竭。霍乱具有发病急，传播快，死亡率高的特点。自1817年以来在世界范围内先后引起过七次大流行。直至今日仍在亚洲、非洲、南美洲等地流行，被世界卫生组织定为必须检疫的国际传染病，也是我国两种甲级传染病之一。
霍乱弧菌主要定殖于宿主肠道细胞表面。菌体进入宿主小肠后，在鞭毛的作用下穿粘膜表面的粘液层，借助菌毛的作用粘附于肠壁细胞表面后大量繁殖，并在定殖区域分泌霍乱毒素作用于附近组织，使肠道细胞分泌功能失常。稳定而有效的定殖于感染区域是霍乱弧菌致病性的关键。霍乱弧菌的定殖是一个复杂的过程，人多通过受到污染的水源感染霍乱弧菌，经由消化系统进入人体后首先到达胃部，在克服宿主的胃酸和免疫反应抵御后进入小肠，穿过黏液层定殖于小肠上皮细胞表面后，以肠道粘膜内的营养物质迅速繁殖，并释放相应的毒力因子产生致病性，之后随排泄物排出体外的霍乱弧菌再次进入到水生环境中造成新的感染，整个过程受到诸多因素的影响与调控，涉及到很多基因，包括一些霍乱弧菌毒力因子也有参与。
前期通过查阅文献发现一个霍乱弧菌毒力因子MakA，其对于霍乱弧菌在宿主体内定殖的能力有一定的影响，但具体影响程度以及影响机制都未被研究。本文首先通过体外培养实验，构建小鼠感染模型的体内实验证实MakA确实会对霍乱弧菌的定殖能力产生影响，其会阻碍霍乱弧菌的定殖过程，降低其定殖能力。霍乱弧菌进入肠道后会引起附近的肠道组织炎症，是否产生炎症，炎症的程度可以作为衡量霍乱弧菌是否成功定植于肠道，定殖程度高低的指标。而炎症实际是机体免疫系统对抗外界侵入的一种反应，多种细胞因子参与免疫反应过程。白细胞介素在炎症反应中起重要的作用，肿瘤坏死因子参与机体抵御各种病原体的入侵因此选择测定小鼠感染细菌后肠道组织中白细胞介素18（interleukin18,IL18）、白细胞介素1β（interleukin1β,IL1β）以及肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor ,TNFα）三种细胞因子的水平来间接反映不同菌株定殖能力的差异[18]。比较感染两种菌株后小鼠肠道组织中细胞因子的水平可以发现感染缺失株的小鼠，免疫系统的反应强度较感染野生型的小鼠相比明显降低，说明MakA会对宿主免疫系统产生更强烈的刺激，致使霍乱弧菌更容易被免疫系统发现，产生更强烈的免疫反应将霍乱弧菌清除，使其难以稳定定殖，对其定殖过程造成阻碍，不利于其定殖后种群的扩增以及毒性物质的产生。

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