目录
摘 要 I
关键词 I
ABSTRACT II
KEY WORDS II
引言 1
1 材料与方法 3
1.1 菌株及质粒 3
1.2 主要试剂与仪器 4
1.3 培养基配制方法 4
1.4 基因敲除 4
1.5 质粒回补 4
1.6 荧光蛋白标记技术 5
1.7 自噬诱导 5
1.8 表型检测 5
1.8.1 检测供试菌株在不同pH下的生长表型 5
1.8.2 荧光显微镜观察蛋白或液泡的定位 5
1.8.3 免疫印迹实验检测GFPAtg8的降解 6
1.9 氨基酸序列比对与结构预测 6
1.9.1 Vph1与Stv1氨基酸序列来源 6
1.9.2 Vph1与Stv1氨基酸序列比对与结构预测 6
2 结果与分析 7
2.1 酿酒酵母仅在VPH1和STV1同时缺失时方出现自噬体降解缺陷 7
2.1.1 自噬诱导后vph1Δstv1Δ的液泡内出现自噬体堆积 7
2.1.2 vph1Δstv1Δ回补任一或全部缺失基因均可恢复正常表型 8
2.2 vph1Δstv1Δ的液泡内pH升高使液泡水解酶活性降低导致自噬缺陷（预测） 9
2.2.1 vph1Δstv1Δ的自噬缺陷由液泡水解酶表达量或活性降低引起（预测） 9
2.2.2 过表达Pep4不能弥补vph1Δstv1Δ的自噬缺陷 10
2.2.3 vph1Δstv1Δ中液泡内pH升高（预测） 11
2.3 Stv1通过囊泡运输实现在vph1Δ中的定位转移（预测） 12
2.3.1 Vph1与Stv1的氨基酸序列和结构具有相似性 12
2.3.2 Vph1/Stv1可在stv1Δ/vph1Δ中发生定位转移 12
2.3.3 在囊泡运输缺陷的vph1Δ中Stv1无法转移到液泡膜上（预测） 13
3 讨 论 14
3.1 VATPase的a亚基 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ￥351916072$ 
通过维持液泡内酸性环境保障自噬的进行 14
3.2 实验不足与展望 15
致 谢 16
参考文献 17
附录1 Vph1与Stv1蛋白性质预测 19
附录2 Vph1与Stv1氨基酸序列比对及分析 20
附录3 引物列表 21
探究酿酒酵母中VATPase复合体a亚基在细胞自噬中的作用
摘 要
细胞自噬（autophagy）是真核生物体内高度保守的胞内物质降解途径。细胞可以通过自噬将错误折叠的蛋白、损坏的细胞器等运输到液泡中降解，从而达到维持细胞稳态的目的。自噬与多种疾病相关，如肿瘤、神经退行性疾病、肝病变等。VATPase（Vacuolartype ATPase）是存在于真核生物中细胞膜及胞内细胞器膜上的一种质子泵转运复合物，能够维持细胞器的酸性以及稳定细胞质基质的pH。近年来研究已发现VATPase的多个亚基对自噬的不同阶段有作用，但a亚基对自噬的影响尚未明确。因此，本文将重点探讨a亚基缺失对细胞自噬的影响。由于疫情原因无法实验，但基于相关的理论知识，以预测结果并图示的方式来展示VATPase的a亚基缺失对自噬的影响，a亚基缺失可能升高了液泡内的pH值，使液泡水解酶活性降低，导致自噬体无法正常降解而堆积。

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