目录
摘要1
关键词1
Abstract2
Key words2
引言3
1．材料与方法4
1.1实验材料 4
1.1.1培养基4
1.1.2菌种保藏管4
1.1.3土样4
1.1.4水样4
1.1.5粪便样品5
1.2分离真菌 5
1.3真菌对霍乱弧菌的抑制实验5
1.4真菌的鉴定5
2.结果与分析6
2.1培养基选取6
2.2真菌分离7
2.3抑菌实验8
2.4有效菌鉴定11
3．讨论 12
致谢14
参考文献 14
一株抑制霍乱弧菌生长的真菌筛选和鉴定
摘 要
霍乱弧菌（Vibrio cholerae）是一种会引起霍乱疾病的革兰氏阴性菌。霍乱弧菌感染宿主主要是霍乱弧菌、宿主以及肠道菌群（gut microbiota）相互作用的过程。实验室前期研究表明肠道细菌可以影响霍乱弧菌的定殖。然而，肠道菌群组成除了包含细菌之外，真菌的存在同样不可忽视。本文的目的是探讨真菌对霍乱弧菌的作用，以弥补这一研究空缺。
本文收集人体粪便样品、环境中土壤和水样，一共分离到53株真菌，其中，筛选到一株对霍乱弧菌有抑制作用的真菌，命名为S101。首先，通过提取DNA以及18S rDNA测序的方法对该菌株进行鉴定；随后，选用实验室已有的肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella Pneumoniae ）和大肠杆菌（Escherichia coli）测试S101的抑菌广谱性；最后通过杀菌实验对S101的杀菌作用进行研究。结果显示，S101被鉴定为禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）。该
本研究筛选到了一株能够抑制霍乱弧菌的真菌，且具有抑菌广谱性。为下一阶段研究真菌对霍乱弧菌的定殖影响以及更完整地揭示肠道菌群整体上对霍乱弧菌的作用机制具有潜在的意义。
引言
1.肠道菌群
人类和动物的胃肠道含有大量微生物，包括细菌，古细菌，病毒和真菌。这种肠道 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ^351916072# 
菌群介导参与能量代谢的不同途径，肠屏障功能和宿主的免疫系统。肠道微生物也与血糖调节和其他生理过程有关[1]。目前，对人类微生物群的研究往往只关注细菌。这主要可以用技术原因来解释。一方面，在基于培养基的分析中检测到的微生物的范围取决于所使用的培养基，因此排除了病毒和大多数原生动物。许多真菌确实生长在用于细菌培养的培养基上，因此难以定量评估。另一方面，基于测序的方法在技术上往往受到DNA提取偏向对细菌基因组分离的影响，16S rDNA的定向测序限制了包括微生物到细菌的范围。
肠道菌群失调的转变可能有助于建立由肠道病原体引起的感染。重要的是要注意，一方面，由于外部影响，微生物群落的变化有助于病原体的入侵和重新繁殖。另一方面，胃肠道感染会影响微生物群的组成。某些微生物群落成员如何影响其他肠道微生物的存活或定殖特性有几种机制。这些微生物间的相互作用强烈地影响着整个微生物群的组成，从而形成高度多样和平衡的微生物群，并有助于防止致病微生物或致病微生物的过度生长：共生微生物可以直接或间接地通过调节宿主免疫系统对某些微生物产生反馈作用。共生微生物可以直接与宿主细胞相互作用。反过来，宿主通过耐受或炎症对微生物作出反应，从而可能导致微生物群的组成发生变化。微生物群的成员相互作用，并且环境因素可以影响这种复杂的相互作用[2]。
肠道微生物群对宿主免疫系统有相当大的影响。B细胞群，即肠浆细胞，也受管腔微生物的影响。肠浆细胞分泌IgA，IgA经肠腔转运。在这里，它们覆盖细菌，从而减少细菌与宿主免疫成分的相互作用。有趣的是，病理生物共生体最好被血浆细胞源性IgA覆盖。这一过程强烈地促进了体内平衡和对抗失调。肠浆细胞诱导的IgA分泌可以是T细胞介导的，也可以是独立于T细胞的[3]。
2.肠道真菌的相关研究
迄今为止，大多数有关肠道微生物的研究都集中在致病的共生细菌上，但是最近的研究表明，真菌可能是与营养代谢以及人类和动物肠道健康相关的另一个重要微生物群。在正常情况下，真菌约占肠道微生物的0.1％，并且在动物肠道中的真菌，细菌和病毒之间或之间存在拮抗，协同作用或共生关系的稳定关系[4]。从回肠到结肠的真菌总数在大多数单胃动物的远端肠道中达到最高密度。尽管对人类和动物的肠道细菌群落进行了广泛的研究，但旨在探索单胃动物胃肠道中真菌多样性的研究工作非常有限。
在研究中发现肠道细菌会通过不同的方式对真菌在肠道的定植产生拮抗作用，比如乳酸杆菌可能通过产生SCFA （短链脂肪酸，shortchain fatty acids）主要是乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐。对抗白色念珠菌，SCFAs不仅促进肠屏障功能，还被证明能抑制白念珠菌丝状体，从而抑制侵袭性[5]。除乳酸杆菌外，其他厌氧肠道菌也能介导定植抗性。在革兰氏阴性菌存在下，IECs（肠上皮细胞，intestinal epithelial cells）和Paneth（潘氏细胞或称帕内特细胞，是小肠内一种非常见的细胞，主要提供宿主防卫微生物侵犯的能力）细胞分泌RegIIIγ，一种对革兰氏阳性细菌具有高度活性的C型凝集素[6]。最近发现大肠杆菌MG1655菌株在缺乏镁的条件下的体外共培养过程中分泌一种杀菌分子，杀死白色念珠菌[7]。很明显，细菌介导了对白色念珠菌（Candida albicans）的定植抗性，但其与不同细菌种类和菌株的相互作用似乎从拮抗到协同不等，并且可能取决于这些相互作用发生的环境。真菌和细菌之间的相互作用需要更详细的研究。识别相互作用的机制和影响这些相互作用的环境因素将为某些肠道疾病提供解决方案。尽管真菌主要被认为是致病菌，但它们可能为宿主提供尚未发现的益处。

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