目录
摘要Ⅰ
关键词Ⅰ
AbstractⅡ
引言
引言
1 材料与方法1
1.1 实验试剂、仪器与培养基1
1.1.1 实验试剂1
1.1.2 实验仪器1
1.1.3 培养基1
1.2 菌株与质粒1
1.3 本文所需引物2
1.4 菌株DNA提取2
1.4.1 基因组DNA提取2
1.5.2 质粒DNA提取3
1.5 picR基因的插入突变3
1.5.1 插入突变质粒的构建4
1.5.2 E.coli DH5α重组菌株的构建 5
1.5.3 三亲接合及突变菌株的筛选5
1.5.4 突变菌株对降解PA的阻遏解除效果验证6
1.6 回补菌株对PA的降解阻遏作用验证6
2 结果与分析7
2.1 picR插入突变菌株的功能验证7
2.1.1 插入突变质粒的构建7
2.1.2 插入突变菌株的筛选7
2.1.3 突变菌株对降解PA的阻遏解除效果验证 8
2.2 回补菌株的功能验证8
3 讨论 9
3.1 Alcaligenes faecalis JQ135分解代谢皮考啉酸的调控基因9
3.2 picR在其它细菌中的分布和功能10
致谢11
参考文献12
附录A 试剂配方13
菌株Alcaligenes faecalis JQ135分解代谢皮考啉酸中
调控基因picR的功能探究
摘 要
皮考啉酸是吡啶甲酸的2位取代同分异构体，是重要的有机合成中间体，属于自然产物。有较高的生物活性以及较强的适用性，在农业农药领域应用十分广泛。然而，皮考啉酸具有生物毒性，对生态系统和人体健康会产生潜在威胁。
本实验室前期从杭州城市废水中分离出粪产碱菌Alcaligenes faecalis JQ135，该菌株能有效降解皮考啉酸,其代谢途径和功能基因簇基本被阐 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ^351916072* 
明：picA将皮考啉酸羟基化生成6羟基吡啶甲酸（6HPA），picB将6HPA羟基化，形成3,6二羟基吡啶甲酸（3,6DHPA），picC将其转化为2,5二羟基吡啶（2,5DHP），picEDFG将其进一步降解为富马酸,在此过程中，picR基因为负调控基因。
微生物降解皮考啉酸具有安全、高效等优点。目前关于皮考啉酸分子调控方面开展的研究较少。本论文以粪产碱菌Alcaligenes faecalis JQ135为研究材料，对野生菌降解皮考啉酸24小时的延滞期进行研究，发现敲除R基因后，降解阻遏解除，延滞期消失，成为组成型表达，降解速率大幅提升。本课题完善了微生物分解代谢皮考啉酸降解特性的研究，对皮考啉酸广泛应用后的污染治理提供理论和技术依据。
THE FUNCTION OF THE REGULATORY GENE PICR IN
PICOLINIC ACIDDEGARDING STRAIN
ALCALIGENES FAECALIS JQ135
ABSTRACT
2picolinic acid is a 2position substituted isomer of picolinic acid and is an important organic synthesis intermediate which is a natural product. With high biological activity and strong applicability, picolinic acid is widely used in pesticide industry. However, picolinic acid is biologically toxic and poses a potential threat to ecosystems and human health.
This laboratory previously isolated an Alcaligenes faecalis strain named JQ135 from municipal wastewater in Hangzhou, which was capable of efficiently degrading picolinic acid. We have elucidated the strain’s degradation pathway and functional genes, which occurs as follows: PA was initially 6hydroxylated to 6hydroxypicolinic acid (6HPA) by picA. 6HPA was then 3hydroxylated by picB, to form 3,6dihydroxypicolinic acid (3,6DHPA), which was then converted into 2,5dihydroxypyridine (2,5DHP) by picC. 2,5DHP was further degraded to fumaric acid through picEDFG. In this process, the picR gene is a negative regulatory gene.

原文链接：http://www.jxszl.com/swgc/smkx/606488.html