目录
摘要1
关键词1
Abstract2
Key words2
引言（或绪论）3
1□材料与方法4
1.1□试验材料 4
1.2□试验方法 4
1.2.1□小孢子分离与培养4
1.2.2□AG和AGP处理5
1.2.3□CH处理5
2□结论与分析5
2.1□小孢子发育时期与花蕾大小关系5
2.2□AG、AGP对青花菜小孢子胚胎发生的影响6
2.3□CH对青花菜小孢子胚胎发生的影响7
3□讨论8
4□结论10
致谢10
参考文献10
表1青花菜小孢子发育时期与花蕾大小关系5
表2 AG、AGP对青花菜小孢子胚胎发生的影响6
表3 CH对青花菜小孢子胚胎发生的影响7
青花菜游离小孢子培养胚胎发生体系的优化
摘 要
目前，国内外许多学者已经在青花菜游离小孢子培养技术上取得了一定的进展，但是很多具有价值的甘蓝材料小孢子产量低而不稳定，植株再生率低仍是实际应用中的困难所在。本研究为优化青花菜游离小孢子培养胚胎发生体系，提高出胚率，以3个青花菜品种作为供试材料，研究了小孢子发育时期与花蕾长度的关系，以确定适宜小孢子培养的取材时期。结果表明：在所选三个供试品种中，适宜于小孢子培养的最适花蕾大小略有差异，但最适长度都在3.00~3.49mm之间。，此外，培养基的成分及附加物质对青花菜游离小孢子胚发生频率有着至关重要的影响，本文通过在培养基中分别添加AG,AGP,CH，探究其三种物质对小孢子出胚率的影响，得出：添加AG,AGP和CH都会显著促进了青花菜小孢子培养的出胚数，其中10 mg/L AG或10 mg/L AGP 或200mg/L mgL1CH在促进小孢子胚胎发生方面取得最佳效果。
引言
我国青花菜栽培历史已有三十余年，现今已经实现了规模化经营，零散种植被规模化种植所取代。然而，由于我国青花菜育种研究工作开展较晚，所以缺乏优良的种质资源。目前，我国的青花菜种子仍依靠国外进口，导致在种植方面， *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ￥351916072￥ 
地方差异大，高效种植技术推广不足，再加上青花菜加工新工艺的缺乏，导致我国青花菜出口面临挑战[1]。
青花菜为异花授粉作物，具有明显的杂种优势，在选育杂种亲本时，需要至少6代以上的连续自交，才可以得到相对稳定的自交系。这一过程大大加长了育种年限。
单倍体育种是一种现代化育种技术，是指利用组织培养诱导产生单倍体植株，再经由染色体自然加倍或人工加倍，从而获得纯合的双单倍体。单倍体材料一般情况下自然发生概率很小，因此游离小孢子培养技术成为人工诱导获得单倍体植物的主要途径[2]。
游离小孢子培养技术是由Lichter(1982)在油菜上首创的单细胞培养技术，该技术是指将小孢子通过分离手段，从花药中分离出来，然后接种液至体培养基，经由胚状体或愈伤组织的诱导，再生长成完整的单倍体植株；而后经过自发或诱导染色体加倍，成为正常可育的纯合二倍体植株。其实质是利用雄配子离体培养成单倍体植株，进而在经过人工或自然加倍而育成纯合二倍体植株的过程[3]。而经由游离小孢子培养技术所获得的双单倍体（DH）纯合群体可以直接用于植物育种，从而加快了选择速率。同时，由于配子体基因丰富，DH系能从亲本中所得随机排列的配子，因此，DH群体会高频率出现受隐形基因控制的优良性状，从而丰富了种质资源。由此技术培养成植株较快，可在短时间内获得大量优良单倍体植株，可迅速稳定性状，因此甘蓝类植物的单倍体育种多采用此方法。
取样的时期是小孢子胚状体是否顺利发生的影响条件之一。取样时期一般包括季节、花期、一天中的采样时间及所采花蕾的小孢子发育时期[4]。其中小孢子发育时期对小孢子培养过程具有更重要的意义。
阿拉伯半乳聚糖（AG）是一类长的，高度支链的有阿拉伯半糖和半乳聚糖组成的中性多糖[5]。前人研究表明，AGPs在花药发育与花粉管生长、合子第一次分裂和胚胎发育等过程中发挥这重要功能[6]。它参与胚胎的萌发、子叶形成、细胞壁纤维素和果胶沉淀，通过控制胚胎细胞分裂从而影响胚的发育[6]。且其具有免疫调控活性，所以可直接作用于小孢子，对于胚的培养和成苗产生影响。
阿拉伯半乳聚糖蛋白（AGP）是被高度糖基化的富含羟脯氨酸的一大类蛋白质[7]，涉及到细胞的增殖，模式生长及微生物相互作用的很多生物学过程[8] 。在AGP的核心模块区域包含在较大的蛋白质中，且所有的蛋白质都具有与细胞壁代谢有关的功能。结果表明，AGPs参与植物细胞增殖与生长、细胞分化、有性生殖中胚子发育、胚胎的模式建成，在合子分裂和胚胎发育等过程中发挥着重要作用[9]。
水解酪蛋白（CH）是一种氨基酸复合物，被广泛用作体细胞胚培养的添加物[10]。对胚的发生和发育有着良好的促进作用，为愈伤组织提供丰富的氮素，从而刺激细胞分裂。有研究表明，水解酪蛋白能够促进愈伤组织的生长速度,诱导不定芽的分化[11]。
现今，尚无完整报道诱导胚胎构成机理和小孢子发育成完整植株的诱发机理，所以就目前实际应用来说，解决胚胎的诱导率以及胚状体再生频率不高的问题首当其冲。

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