目录
摘要1
关键词1
Abstract2
Key words2
引言3
1 材料与方法4
1.1 材料 4
1.1.1 供试菌株4
1.1.2 供试药剂4
1.1.3 常用试剂及培养基4
1.1.4 抗生素5
1.2 方法 5
1.2.1 禾谷镰孢菌的培养与保存5
1.2.2 CTAB法提禾谷镰孢菌基因组DNA5
1.2.3 PCR相关6
1.2.4 载体构建8
1.2.5 禾谷镰孢菌原生质体转化技术及转化子的验证9
1.2.6 基因表达量测定10
1.2.7 突变体生物学表型测定11
1.2.8 突变体药敏性测定12
2 结果与分析12
2.1 禾谷镰孢菌FgDmn1蛋白的鉴定及其进化树分析12
2.2 禾谷镰孢菌FgDMN1基因敲除/回复突变体的构建与转化子的验证13
2.3 禾谷镰孢菌FgDMN1基因敲除/回复突变体生物学表型分析16
2.3.1 菌丝生长速率测定16
2.3.2 DON毒素测定17
2.4 禾谷镰孢菌FgDMN1基因对呼吸链抑制剂类杀菌剂敏感性的调控18
2.4.1 对琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂药敏性的测定18
2.4.2 对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂药敏性的测定19
3 讨论 20
致谢23
参考文献24赤霉病菌线粒体分裂相关基因FgDMN1
对呼吸链抑制剂类杀菌剂药敏性的调控作用
摘 要
由禾谷镰孢菌复合种（Fusarium graminearum species complex, FGSC）引起的小麦赤霉病（Fusarium Head Blight, FHB）是对小麦生产威胁最大的真菌病害之一。它的发生不仅造成小麦产量损失、品质下降，还会导致罹病麦粒中真菌毒素积累，威胁人、畜健康。
近年来，呼吸链抑制剂类杀菌剂因作用位点新颖、抗 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ^351916072* 
菌谱广等优点迅速发展，在小麦赤霉病的防治中有较好的应用前景。本项目组前期研究发现，呼吸链抑制剂类杀菌剂不仅能导致赤霉病菌线粒体碎片化，干扰线粒体动态平衡，而且能显著影响DON生物合成。为了进一步揭示线粒体分裂相关基因对呼吸链抑制剂类杀菌剂药敏性的调控作用，分析呼吸链抑制剂类杀菌剂对线粒体动态平衡的影响，本研究在禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum）野生型菌株PH1中确定了一个与酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）线粒体分裂相关基因DMN1同源的基因FgDMN1。
本文中，我们根据同源重组的原理构建了FgDMN1基因敲除/回复载体，利用原生质体转化技术成功获得了敲除突变体△Fgdmn1、回复突变体△Fgdmn1C。在对FgDMN1基因的功能验证中我们发现△Fgdmn1的菌丝生长速率、气生菌丝量、产子囊壳量显著下降，△Fgdmn1C则恢复到与野生型菌株PH1相似的水平，这说明该基因调控禾谷镰孢菌的营养生长和有性生殖。之后，我们选取了四种呼吸链抑制剂类杀菌剂进行突变体药敏性测定，结果表明△Fgdmn1对琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂氟吡菌酰胺、啶酰菌胺的敏感性均显著上升；对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂吡唑醚菌酯、丁香菌酯的敏感性均显著下降，这说明FgDMN1基因对于它们的作用位点琥珀酸脱氢酶和泛醌具有不同的调控机制。

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