由于线粒体是细胞有氧呼吸的主要场所，其基质内含有与三羧酸循环所需的全部酶类,内膜上具有呼吸链酶系及ATP酶复合体，为细胞的生命活动提供场所，是细胞内氧化磷酸化和形成ATP的主要场所。线粒体中基因的表达情况也将能够间接的揭示叶螨对寄主植物的适应情况。并且线粒体基因组在种群的系统发育和遗传分化发挥重要作用。现阶段已经测定的昆虫线粒体基因组的序列约有两百多种，但是有关伊氏叶螨的线粒体基因组尚无报道。我们对伊氏叶螨的线粒体基因组进行了测序与分析，同时也分析了叶螨线粒体基因组中的13个蛋白编码的基因，在转移寄主之后其表达量的变化情况。结果显示伊氏叶螨的全线粒体基因组为典型的环形DNA，长度为13064 bp。线粒体基因组j链的A + T含量为84.47%。我们一共鉴定出37个基因，其中蛋白编码基因13个，核糖体RNA基因2个，转移RNA基因22个。通过转录本reads回帖，我们研究了伊氏叶螨线粒体基因组上能量代谢相关基因在转移寄主过程中的响应。发现伊氏叶螨从番茄转移到豇豆、茄子时，有7个蛋白编码基因的大多数的表达量升高，说明转移寄主之后伊氏叶螨需要产生更多地能量来维持自身的活力。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words2
引言2
综述2
1伊氏叶螨线粒体基因组的提取2
1.1供试叶螨 2
1.2伊氏叶螨DNA的提取3
1.3PCR引物的设计3
1.4PCR扩增3
2伊氏叶螨线粒体基因组的测序及分析3
2.1线粒体基因组的测序、拼接、注释4
2.2 构建系统发育树4
2.3 线粒体基因组在寄主适应性机制方面的分析4
3伊氏叶螨线粒体基因组的特征4
3.1A+T富集区6
3.2tRNA基因7
3.3系统发育树的构建8
3.4伊氏叶螨转移寄主线粒体基因的表达情况9
4讨论10
致谢10
参考文献10
线粒体基因组在伊氏叶螨适应性方面的研究
引言
引言
综述：线粒体是细胞有氧呼 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ￥351916072$ 
吸的主要场所，其基质内含有与三羧酸循环所需的全部酶类,内膜上具有呼吸链酶系及ATP酶复合体，为细胞的生命活动提供场所，是细胞内氧化磷酸化和形成ATP的主要场所,有细胞"动力工厂之称。昆虫的线粒体基因组全长一般是在15000bp左右的闭合的呈双链的DNA分子，通常包括37个基因[1][2]：有22 个 tRNA 基因、蛋白编码的 13 个基因、2 个 rRNA 基因和 一段AT 富集区[3]。线粒体基因组的大小依据种群的不同而有一定的差异，这是由基因长度差异、非编码区域的长度差异以及基因缺失[4]还有一些重复的编码基因等而引起的[6]。此外，线粒体基因组可能不一定是37个基因， rRNA和tRNA 可能存在结构差异等。比如，疟原虫的线粒体基因组中只有 3 个蛋白编码基因，人类及昆虫则有 13 个。现阶段已经测定的昆虫线粒体基因组的序列约有两百多种，其中包括截形叶螨，但是有关伊氏叶螨的线粒体基因组尚无报道。
从寄主适应的角度出发，伊氏叶螨被认为是一种外来入侵的茄科专食性的叶螨，能够抑制植物的防御。在本章我们通过测定伊氏叶螨的线粒体基因组，分别对基因组的碱基组成、基因结构、rRNA和tRNA基因、蛋白编码的基因和AT 富集区进行分析，之后与截形叶螨比较对伊氏叶螨转移寄主之后的线粒体基因组的13个蛋白编码的基因表达情况进行分析，为伊氏叶螨的系统发育及进化提供依据，为研究叶螨对寄主植物的适应机制奠定深厚的基础
1 伊氏叶螨线粒体基因组的测序
1.1 供试叶螨
伊氏叶螨（Tetranychus evansi Baker & Pritchard）是2018年3月10日采于大学理科楼实验基地的番茄上，经鉴定之后放于养虫笼的番茄植株上饲养。
1.2 伊氏叶螨DNA的提取
摘取养虫笼中的番茄叶片于显微镜下，挑取 1 头伊氏叶螨的雌成螨于1.5ml的离心管中，来提取 DNA。我们运用 DNA 提取试剂盒（Qiagen, Hilden, Germany）来提取DNA 。具体步骤：
1）向1.5ml的离心管加入 40 μL ATL ，用研磨棒将叶螨研磨充分；吸取140 μL ATL 来冲洗研磨棒；
2）向离心管中加入 25 μL 蛋白酶 K，充分混匀并简单离心；
3）放入金属浴中450 r，56 °C 孵育 3 h；
4）向离心管中加200 μL AL，充分混匀（若出现白色沉淀，将离心管放入金属浴至沉淀消失）；
5）向离心管中加入 200 μL 酒精，混匀充分至油状澄清；
6）吸取离心管中的溶液与柱子中，静置 5 min;于离心机 8000 rpm 离心 1 min，扔掉滤液；
7）将柱子移至新管上，加入500 μL AW1，静置 5 min；于离心机8000 rpm 离心 1 min，扔掉滤液；
8）将柱子移至新管上，加入500 μL AW2，静置 5 min；于离心机14000 rpm 离心 3 min，扔掉滤液；
9）将柱子打开盖子放入通风橱15 min吹干柱子里残留的酒精；
10）向柱子中加入 30 μL AE，离心机12000 rpm 离心 1 min，滤下的澄清液体为 DNA溶液 ；
11）重复步骤（10），将DNA溶液转移到PCR管里，用于之后的实验或放于20 °C的冰箱保存。
1.3 PCR引物的设计
依据引物设计的基本原则：模板和引物的序列应密切互补；避免引物之间形成发夹结构或者二聚体；避免银灰会在模板的非目的位点产生错配。参照 Simon（1994）提出来的膜翅目的通用引物，运用设计引物的软件Primer Premier 5 来设计特异性的引物。
Tecox1F：5 CCAAGAGGTGGAGGAGATCCTA 3
Tecox1R：5 GCTCCTGCTAAAACTGGTAAAGC 3
TecytbF：5 TTTTTGGGCACCCAGAAGTTT 3
TecytbR：5 AATCCGTGGAAAACATAAATCTATAG 3

原文链接：http://www.jxszl.com/nongxue/zwbh/607418.html