目录
关键词 1
ABSTRACT 2
KEY WORD 2
引言 3
1 材料与方法 5
1.1 实验材料 5
1.1.1 供试菌株及保存 5
1.1.2 供试植物 5
1.1.3 主要生化试剂盒 5
1.1.4 主要仪器 5
1.2 培养基的制备 5
1.2.1 LB培养基的制备 5
1.2.2 抗生素类培养基的制备 5
1.3 质粒载体 5
1.4 核酸操作 5
1.4.1 基因扩增 5
1.4.2 DNA扩增片段的产物纯化 6
1.4.3 质粒DNA的提取 7
1.5 载体构建 7
1.6 大肠杆菌JM109感受态细胞的制备及转化 8
1.6.1 用Inoue法制备大肠杆菌JM109感受态细胞 8
1.6.2 大肠杆菌JM109感受态细胞的转化 8
1.7 农杆菌GV3101电击感受态细胞的制备与转化 9
1.7.1 农杆菌GV3101电击感受态细胞的制备 9
1.7.2 农杆菌GV3101电击感受态细胞的转化 10
1.8 农杆菌介导的瞬时表达 10
1.9 本氏烟中总蛋白的提取与目的蛋白的验证 10
1.9.1 本氏烟叶片总蛋白的提取 10
1.9.2 CoIP验证 11
1.9.3 蛋白质的SDSPAGE电泳 11
1.9.4 蛋白质的Western blot 11
1.10 LCMS/MS分析 12
1.11 信号肽预测 12
2 结果与分析 12
2.1 候选互作蛋白的获得 12
2.2 pBINCGFP载体的构建结果 12
2.2.1 目的基因的扩增结果 12
2.2.2 大肠杆菌转化的菌落PCR检测结果 12
2.2.3 农杆菌电击转化的菌落PCR验证 13
2.3 用CoIP分别验 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: #351916072# 
证PsLip1和ILiP1、ILip2的体内互作情况 13
3 讨论 14
3.1 疫霉质外体效应分子的研究进展 14
3.2 寄主植物中效应分子的靶标筛选 15
致谢 16
参考文献 16
附录1 19
附录2 20
大豆疫霉质外体效应分子PsLip1的靶标筛选
摘要
大豆疫霉造成的根腐病是大豆生产上的重要病害，对大豆生产造成严重的危害。大豆疫霉在与寄主大豆互作的过程中，会向植物细胞中分泌大量效应分子，使它们在寄主植物质外体或细胞内发挥作用，通过不同的方式来操纵植物免疫，促进大豆疫霉的侵染。根据效应分子在寄主中靶向的位点不同，可将其分为质外体效应分子和胞内效应分子两大类。本文对实验室前期发现的一个大豆疫霉候选质外体效应分子PsLip1进行研究。前期生物信息学分析已经发现，PsLip1具有脂酶功能域，在植物细胞外通过发挥毒性功能促进侵染，且该功能依赖于脂肪水解酶活性。PsLip1所引起的植物细胞的死亡需要信号肽的参与，但不需要共受体NbBAK1和NbSOBIR1。寄主植物识别PLip1的具体机制还不清楚，因此关键的一步是筛选PsLip1的互作蛋白。本实验将体外纯化的PsLip1蛋白与本氏烟叶片共孵育，收集烟草叶片总蛋白，通过LCMS/MS分析及蛋白质测序，筛选出2个PsLip1的候选互作蛋白ILip1和ILip2，并利用免疫共沉淀对ILip1和ILip2进行体内互作验证，为进一步研究PsLip1的生物学功能提供参考。

原文链接：http://www.jxszl.com/nongxue/zwbh/607369.html