目录
摘 要 III
关键词 III
ABSTRACT IV
KEY WORDS IV
引言 1
1材料与方法 1
1.1 供试材料 1
1.2 培养基及试剂配制 2
1.2.1 培养基 2
1.2.2 抗生素 2
1.3 PsRLK 敲除转化子的游动孢子趋化性测定 2
1.3.1 游动孢子的诱导 2
1.3.2 游动孢子趋化性测定 2
1.4 PsGPA1的表达量分析 3
1.4.1 RNA提取 3
1.4.2 逆转录 3
1.4.3 实时荧光定量PCR（qRTPCR） 4
1.5 ClucPsGPA1和PsRLKNLuc载体构建 4
1.5.1 质粒提取 4
1.5.2 扩增目的片段 5
1.5.3 片段纯化 5
1.5.4 载体构建 6
1.5.5 单片段同源重组 6
1.5.6 热激转化大肠杆菌及验证 6
1.5.7 电击转化农杆菌及验证 6
1.6 splitLuc体系验证PsLRRRLK与G蛋白的互作 7
1.6.1 本氏烟注射 7
1.6.2 活体成像仪的使用 7
2 结果与分析 7
2.1 五个PsRLK敲除突变体的游动孢子趋化性下降 7
2.2 PsRLK突变体中PsGPA1基因表达量检测 8
2.3 ClucPsGPA1和PsRLKNLuc载体构建 9
2.4 splitLuc体系验证PsRLK与G蛋白的互作 10
3 讨论 11
致谢 11
参考文献 13
大豆疫霉LRRRLK家族中调控游动孢子趋化性基因的筛选及其与Gα蛋白的互作研究
摘 要
大豆疫霉（Phytophthora sojae）引起的大豆根腐病是一种分布广泛的毁灭性病害。大豆疫霉释放的游动孢子可特异性识别寄主根部释放的异黄酮而向其聚 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ^351916072* 
集，最终成功侵染寄主，故游动孢子趋化性是大豆疫霉侵染寄主的关键步骤。研究表明，G蛋白（Guanine nucleotidebinding protein，Gprotein）信号通道对大豆疫霉游动孢子趋化性有调控作用。在拟南芥中，G蛋白将RLK的信号感知与下游效应器结合起来，二者互作磷酸化，参与植物的信号转导。本实验室前期在大豆疫霉中鉴定了24个LRRRLK蛋白（PsRLK）并获得单基因敲除突变体，通过表型分析发现LRRRLK在大豆疫霉产孢、致病等过程扮演重要角色。本文对24个PsRLK基因敲除突变体进行游动孢子趋化性表型测试，筛选出趋化性下降的5个PsRLK基因敲除突变体。利用Luciferase Complementation Imaging Assay技术探索大豆疫霉LRRRLK与G蛋白PsGPA1的互作关系，发现这5个PsRLK与PsGPA1皆存在明显的互作关系。研究结果对深入了解大豆疫霉游动孢子趋化性调控机制及解析大豆疫霉体内信号转导过程具有重要帮助，同时对深入了解大豆疫霉的致病分子机制及开发新型农药提供潜在靶标具有重要的理论指导意义。

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