目录
摘要Ⅱ
关键词Ⅱ
AbstractⅡ
引言
引言
1实验材料1
1.1载体 1
1.2菌株 1
1.3对照质粒1
1.4文库1
2实验方法1
2.1酵母筛库1
2.1.1诱饵蛋白的自激活和毒性检测1
2.1.2酵母融合筛库1
2.2筛库结果验证2
2.2.1材料 2
2.2.2一步法酵母转化法3
3结果与分析4
3.1酵母文库的筛选4
3.2 酵母双杂交验证4
3.3测序结果6
4讨论7
致谢8
参考文献9
表31 各缺陷型平板上单克隆的数量4
图31 酵母双杂交实验结果5
表33 序列分析结果6
MPKKK7互作蛋白的筛选
摘 要
番茄斑萎病毒 (Tomato spotted wilt virus, TSWV)在世界范围内对多种植物产生严重危害。番茄免疫受体蛋白Sw5b通过识别TSWV编码的移动蛋白NSm对其发挥抗性。丝裂原活化蛋白激酶( mitogenactivated protein kinase, MAPK）是一类丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶，在植物免疫反应信号转导过程中发挥重要作用。实验室的前期研究筛选到了与Sw5b互作的蛋白NbMPKKK7，本课题拟在此基础上用NbMPKKK7蛋白为诱饵，利用酵母双杂交系统筛选本氏烟cDNA文库，鉴定与之互作的蛋白。研究结果有助于了解Sw5b对TSWV发挥抗性的下游信号途径，为深入揭示Sw5b抗病反应的分子机制奠定基础。
IDENTIFICATION OF INTERACTING PROTEINS OF MPKKK7
ABSTRACT
Tomato spotted wilt virus (TSWV) causes severe disease in great many plant species worldwide. Tomato immun *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ^351916072# 
e receptor Sw5b confers resistance against TSWV through recognizing the movement protein NSm encoded by the virus. Mitogenactivated protein kinase (MAPK) is a serine/ threonine protein kinase, which plays an essential role in signal transduction pathways of plant immune responses. Previous study in the lab found a MPKKK7 protein that interacts with Sw5b. Based on this finding, this project intends to use MPKKK7 as a bait to screen the cDNA library of Nicotiana benthamiana to identify its interactors. This study shall help us to understand the downstream signaling pathway of Sw5b mediated resistance against TSWV and further illustrate the molecular mechanism of Sw5b mediated immune response.
KEY WORDS: Tomato spotted wilt virus；immune receptor protein；Sw5b；Yeast twohybrid；proteinprotein interaction
番茄斑萎病毒 (Tomato spotted wilt virus, TSWV)是一种侵染植物的负义链RNA病毒。它的粒体为球状，直径大约80120nm，外表面上有一层由双层膜结构组成的囊膜。TSWV的基因组由三条RNA组成，根据它们的分子量大小分别命名为L RNA、M RNA和S RNA。在这三条RNA的末端有一段保守的互补序列，它们形成了一个类似锅柄的结构[1]。TSWV作为我国的植物检疫对象，对于番茄、黄瓜、莴苣、烟草、马铃薯等产生严重危害。
在病原物入侵植物细胞的时候，植物检测到病原体的相关分子模式（Pathogen associated Molecular Pattern，PAMPs）后会激活PAMP诱导的免疫反应（PAMP triggered immunity, PTI），在此过程中丝裂原活化蛋白激酶( mitogenactivated protein kinase, MAPK）级联反应也会被激活 [2]。与此同时，病原物为了能够侵染植物，进化产生了突破植物PTI免疫反应的效应蛋白（effector）。植物则进一步进化出了相应的免疫受体蛋白来识别病原物的这些效应因子并触发效应因子介导的免疫反应（Effectortriggered immunity, ETI）。ETI的特点是在病原物的侵染点附近产生过敏性坏死反应（Hypersensitive response, HR），这种反应是以植物自身的细胞死亡为代价防止病原物的扩散[3]。

原文链接：http://www.jxszl.com/nongxue/zwbh/607336.html