植物内生菌是指生长于健康植物内部并不引起病害的微生物。内生真菌能够产生多种多样的次生代谢物，同时也是产生生物活性物质的重要来源。从微生物代谢产物中筛选具有抑菌活性的化合物是寻找新型绿色农药的有效策略。实验室前期从药用植物栾树上发现的一株抗多种植物病原真菌的活性菌株PLSS3，经鉴定为炭角菌Xylaria sp.。通过大批量发酵和一系列的柱层析、高效液相色谱等分离技术以及波谱学等方法对菌株PLSS3次生代谢产物进行分离纯化及结构鉴定，共获得11个化合物。化合物10，11对水稻恶苗病菌，番茄灰霉病菌均有较好的抑菌效果，其中对番茄灰霉病菌的抑菌活性分别为79%和72%。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
实验材料 2
1.1.1 菌株来源2
1.1.2 培养基2
1.1.3 主要仪器设备2
1.1.4 常用试剂3
1.1.5 试剂盒3
1.2 实验方法 3
1.2.1 菌株Xylaria sp. PLSS3的平板对峙实验3
1.2.2 菌株Xylaria sp. PLSS3的液体发酵3
1.2.3 菌株Xylaria sp. PLSS3乙酸乙酯相提取物的制备3
1.2.4 抗菌活性测定3
1.2.4.1 菌丝生长速率法3
1.2.5 菌株Xylaria sp. PLSS3的菌株鉴定4
1.2.6 菌株Xylaria sp. PLSS3次生代谢产物的分离纯化及鉴定4
1.2.7 统计分析4
2 结果与分析4
2.1 内生真菌抗菌活性菌株筛选4
2.2 菌株Xylaria sp. PLSS3菌种鉴定5
2.3 菌株Xylaria sp. PLSS3乙酸乙酯相粗提物对多种病原真菌抑制活性5
2.4 菌株Xylaria sp. PLSS3次生代谢产物的分离纯化与鉴定 5
2.4.1 发酵液产物分离纯化 5
2.4 2化合物结构 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: #351916072# 
解析6
2.5 化合物抑菌活性测定13
3.讨论13
致谢13
参考文献 14
附录A 16
栾树内生菌Xylaria sp.PLSS3次生代谢产物研究
引言
引言
新农药研制通常是先导化合物基础上经结构修饰、优化而得。天然产物，尤其是植物源和微生物源活性物，已经或正在为农药的活性结构提供多种多样的先导构型[1]。如：以天然产物为先导化合物开发的杀菌剂乙蒜素、稻瘟灵、恶霉灵；除草剂双丙氨膦，及以前者为灵感开发的广谱性除草剂草铵膦；杀虫剂除虫菊、鱼尼丁、藜芦碱、阿维菌素和多杀菌素等[2]。
植物内生菌 (endophytic fungi)是指生活史的整个阶段或者部分阶段寄生在健康的植物内，且寄主植物没有表现出病理变化的一类寄生菌。植物内生菌通过广泛定植在植物组织内，与病原菌在体内相互竞争空间、营养，使得病原菌不能有效吸收营养物质，从而阻止病原物侵染，为植物提供屏障作用[3]。在与病原菌竞争的同时，植物内生菌可以释放出一些信号物质、抗生素和毒素等活性物质，诱导植物自身发生免疫反应，提高植物的抗病性[4]。因此从植物内生真菌次生代谢产物中分离提取具有药用活性的物质，既可以保护植物资源，又可以为寻找新的药物提供分子源[5]。近年来，内生菌的重要作用正在被科学家广泛发现并不断深入研究。
大学植物保护学院天然产物与农药化学实验室前期从药用植物栾树（Koelreuteria paniculata）中分离筛选出一种内生真菌，经鉴定为炭角菌（Xylaria sp.）。炭角菌属（Xylaria sp.）属于子囊菌亚门、核菌纲、球壳目炭角菌科，可腐生或内生[6]。炭角菌是一种木腐菌，具有降解木质素和纤维素的能力[7]。该属的代谢产物丰富，现已分离鉴定出如细胞松弛素、萜类物质、聚酮化合物、多肽类等化合物[8]，其次生代谢产物具有抗氧化、抗菌、抗癌等生物活性[9]。
炭角菌属真菌（Xylaria sp.）的次生代谢产物具有多样和抑菌活性的特点。本试验通过对栾树内生菌炭角菌Xylaria sp.PLSS3菌株次生代谢产物的化学成分及其抑菌活性进行研究，期望获得结构新颖、活性良好的天然化学产物，为绿色生物农药的开发提供重要依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 菌株来源
植物内生菌Xylaria sp. PLSS3和以下植物病原真菌均来自大学植物保护学院天然产物与农药化学实验室。
8株植物病原菌分别如下：
水稻纹枯病菌 Rhizoctonia solani
油菜菌核病菌 Sclerotinia . sclerotiorum
马铃薯干腐病菌 Fusarium sulphureum
番茄灰霉病菌 Botrytis cinereal
小麦全蚀病菌 Gaeumannomyces graminsis
水稻恶苗病菌 Fusarium moniliforme
黄瓜炭疽病菌 Colletotrichum orbiculare
小麦赤霉病菌 Fusarium graminearum
1.1.2 常用培养基
PDA培养基：马铃薯洗净、去皮称重200g，切成小块（长宽2cm左右）放入烧开的沸水中煮1520min，待马铃薯变软后，用双层纱布过滤，得滤液。加入琼脂20g，葡萄糖20g，用自来水定容至1000mL，摇匀，分装，封口，121℃高温灭菌20min。
麦芽培养基：将麦芽称得净重20g，放入沸水中煮40min，待麦芽煮软露白后，用双层纱布过滤，留滤液，自来水定容至1000mL，加入葡萄糖20g，1g蛋白胨，摇匀，分装，封口，121 ℃高温灭菌20min。

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