本实验对黄毛草莓（F. nilgerrensis）与东北草莓（F. mandshurica）用秋水仙素处理进行染色体加倍，再通过流式细胞仪检测和染色体计数鉴定其是否加倍成功，获得了相应同源四倍体。之后，对二倍体和获得的四倍体植株的部分生物学性状（植株的大小、叶片大小、花萼大小、叶片厚度、叶柄长和直径、匍匐茎直径、花柄长和直径、花梗长和直径、瘦果大小、保卫细胞大小以及叶绿素的含量）进行了观察比较，发现四倍体表现出的一些优异生物学特性，为进一步利用这些性状提供了数据基础。设计了部分杂交实验，通过统计对花柱内花粉管生长状态观察和坐果情况调查等，评价了两个二倍体野生种及其同源四倍体亲和性，为两个种质参与的杂交育种工作具一定的指导意义。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言（或绪论）3
1材料与方法4
1.1实验材料 4
1.2实验方法4
1.2.1组织培养及染色体加倍技术4
1.2.2流式细胞仪及染色体计数鉴定4
1.2.3形态学指标测定5
1.2.4自交、杂交授粉实验5
1.2.5花粉管生长动态观察5
1.2.6花粉活力测定、花粉形态观察5
1.3数据处理与分析5
2结果与分析5
2.1黄毛草莓、东北草莓二倍体及其同源四倍体倍性鉴定5
2.2东北草莓、黄毛草莓二倍体各与其同源四倍体部分性状鉴定7
2.3花粉形态与花粉萌发7
2.4东北草莓、黄毛草莓二倍体各与其同源四倍体自交或杂交（不）亲和性8
3讨论 9
致谢10
参考文献10
图1 鉴定诱导植物的倍性6
表1 Db43、DDb431、Hm45、DHm452部分生物学和细胞学特征 7
图2 花粉特征及萌发率8
图3 自交或杂交隔离授粉后25天的果实发育情况 8
图4 花粉管生长状态9
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及性状鉴定
引言
引言
世界草莓属约有24个种，主要分布在亚洲、欧洲和美洲，由2×，4×，5×，6×，8×等不同倍性构成，其中，森林草莓（F. vesca）、五叶草莓（F. pentaphylla）、黄毛草莓（F. nilgerrensis）、西藏草莓（F. nubicola）、纤细草莓（F. gracilis）、东北草莓（F. mandschurica）、绿色草莓（F. viridis）和裂萼草莓（F. daltoniana）、日本草莓（F.nipponica Lindl.）、饭沼草莓（F.iinumae Makino.）为二倍体种[1]。野生草莓资源的利用是草莓新品种改良的潜力所在[2]，其种质中蕴藏着丰富的优良性状基因资源，是栽培草莓品种改良的重要材料。
黄毛草莓起源于东南亚地区，有生长势强、抗性强、果实色形较好、圆球形、白色、具香气等许多优良特性，但因其染色体倍性低与栽培品种杂交时亲和力不足，难以在草莓品种改良方面发挥作用[3]。东北草莓（F. mandshurica）属自交不亲和类型[4]，果实香味浓郁、抗寒性强、结果性较强，但东北草莓植株较为细弱，与栽培草莓杂交多表现为杂交不结实、杂种不育等。不同染色体倍性草莓种间远缘杂交研究早期多采用染色体加倍结合有性杂交的方法以获取杂种后代，且在森林草莓(Fragaria vesca) 的不同类型种质向栽培草莓转移的过程中获得了成功[5]。Noguchi等[68]用黄毛草莓与栽培草莓品种‘丰香’和‘カレンベリー’杂交得到具桃香味、十倍体栽培品种‘久留米IH1号’和‘桃薰’。但是，中国目前生产上所用草莓品种多为国外引入或利用少数国外引进品种杂交而得,利用国内野生种质资源进行种质资源创新进而改善栽培草莓遗传背景狭窄的现状是重要的研究方向。
秋水仙素诱导是草莓染色体加倍的重要育种途径，通过秋水仙素处理黄毛草莓和东北草莓获得染色体加倍的植株再进行杂交，是利用两种质资源进行种质创新及品种改良的较佳途径。黄毛草莓和东北草莓作为优异的二倍体野生草莓，具有许多优良的性状，二倍体野生草莓与栽培草莓倍性差异较大，将野生草莓中的优良性状转入栽培草莓存在倍性障碍[9]。因此，采用秋水仙素等染色体加倍技术处理二倍体草莓野生种，可获得相对应的同源四倍体植株，通过鉴定其性状或进行部分杂交实验，可为其进一步利用提供一定的材料基础。
1 材料与方法
1．1 实验材料
实验材料黄毛草莓（F. nilgerrensis）与东北草莓（F. mandshurica）保存在大学白马教学科研基地网室，所有的材料都生长在自然条件下。主要调查与实验工作于2019年48月份进行，在此期间室外温度合适，草莓生长正常。
1．2 实验方法
1.2.1 组织培养及染色体加倍技术
取黄毛草莓Hm3、Hm45株系和东北草莓Db43株系的生长健壮的匍匐茎茎尖2cm，后进行无菌处理：用流水冲洗24次，在无菌条件下用70%的酒精表面灭菌40 s，再用0.1%的升汞表面灭菌8 min，无菌水冲洗46次[10]，用灭菌的解剖刀切取1cm左右的茎尖，将其接种于初代培养基，待生长一个月左右转接到丛生芽再生培养基中。待大量的丛生芽长出后，将丛生芽分离并投入到包含有0.15%经孔径0.22μm的水系滤头抽滤灭菌秋水仙素液体三角瓶中，置于25℃摇床中避光震荡培养48h[11]，然后接种到生根培养基中（1/2 MS+0.2mg/L IBA），使其生根，经炼苗后移栽到大田中扩繁。
1.2.2 流式细胞仪及染色体计数鉴定
利用流式细胞仪初步检测是否加倍成功，参考Akiyama方法并略有改进，取45叶片组培苗植株嫩叶约0.1g，并在装有1.0 mL核提取缓冲液［15 mmol/L TrisHCl(pH值 7.5 )，80 mmol/L KCl，20 mmol/L NaCl，20 mmol/L EDTANa2，2.0% PVP，体积分数0.1%的TritonX100］的培养皿中切碎，孵育5 min后，用400目尼龙网过滤，得到细胞核悬浮液。吸取细胞核悬浮液300uL，加入同等体积的碘化丙啶染液(45 mg/L RNaseA,10 ug/mL PI),混合摇匀后置于冰水混合物中避光染色2h后上机测定样品单个细胞核的DNA含量。以相应二倍体草莓为对照，每测10个样品测定1次对照样品。

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