芽休眠是植物抵抗不良生长环境的一种重要适应策略，在多年生植物生长发育过程中有重要作用。休眠相关MADS-box（DAM）基因在植物芽休眠以及休眠解除过程中发挥了重要的作用。本文利用转入VvDAM2基因的苹果愈伤组织，探究VvDAM2基因对于赤霉素以及脱落酸合成代谢的影响。研究表明转入VvDAM2基因的苹果愈伤组织中内源脱落酸含量显著上升，而内源赤霉素含量显著下降；脱落酸相关合成基因表达量上升，相关代谢基因表达量下降，而赤霉素相关合成基因表达量下降。推测VvDAM2基因可以影响脱落酸与赤霉素的合成代谢通路，并以此调控植物芽休眠。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.2 方法 3
1.2.1 VvDAM2基因的扩增3
1.2.2 表达载体的构建3
1.2.3 苹果愈伤组织转基因3
1.2.4 测量内源脱落酸和赤霉素含量4
1.2.5 测量相关基因的表达量4
2 结果与分析4
2.1 VvDAM2基因的扩增4
2.2 表达载体的构建5
2.3 苹果愈伤组织转基因5
2.4 测量内源脱落酸和赤霉素含量5
2.5 测量相关基因的表达量6
3 讨论 7
3.1 VvDAM2基因与内源脱落酸和赤霉素的联系7
3.2 VvDAM2对脱落酸与赤霉素合成代谢相关通路的影响7
致谢8
参考文献8
葡萄VvDAM2基因对赤霉素和脱落酸的合成的影响
引言
引言
在植物的生长过程中，经常会遇到不适宜植物生长的外界环境，如高温、冻害、干旱、涝害等，这些环境会极大程度的影响植物的正常生理活动和生长发育，因此，为了避免这种情况的发生，植物在这些极端环境下会停止生长，只有当满足了一定条件后，植物才会重新开始生长，恢复原来的生理活动，这种现象一般被称为植物的休眠。植物内部能够进行休眠的组 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ^351916072# 
织、器官各式各样，在这些组织器官中芽的休眠是其中被研究的较为频繁且最为常见的休眠方式之一。
葡萄作为仅次于柑橘的世界第二大水果，它的经济价值相当可观。目前我国的葡萄产量在一年年稳步提升中，葡萄作为我国果农的重要作物之一，已经被广泛种植。探究葡萄的休眠机理，在实际的植物生产过程中起着重要的作用。通过对植物的芽休眠进行控制，延长芽休眠时间，从而预防异常气候给生产带来的损失；也可以缩短植物的芽休眠时间，从而提早部分花卉和水果上市的时期，增加园艺作物的经济效益。
植物体内的激素含量以及激素之间的动态平衡，是调节休眠的重要因素之一。植物体内的激素含量以及激素之间的动态平衡，是调节休眠的重要因素之一。脱落酸是调节芽休眠的重要激素，植物能够感知外界的环境变化，通过调节脱落酸含量来传递外界环境的信号，进而调节植物休眠。脱落酸主要在植物的叶片中产生，去除植物的叶片可有效促进芽萌发，而秋冬季落叶较晚的话，将会导致植物体内积累更多的脱落酸，使植物打破休眠所需的需冷量变大。植物体内脱落酸的含量，随着植物休眠深度加深而增加，在脱落酸的含量达到最高点时，植物的休眠也处于最深，而之后脱落酸含量大幅下降，但脱落酸含量的下降与休眠的解除并不完全一致[1]。赤霉素也同样是调节芽休眠的重要激素。植物体内赤霉素的含量随着休眠的加深逐渐减少，随着休眠解除逐渐上升。有许多研究表明，赤霉素可以抑制芽休眠，促进它的萌发。使用赤霉素进行处理可以降低‘明星’牡丹的需冷量，提高萌芽率和成花率[2]；但对于油桃，欧洲杏等对于短日照不那么敏感的植物，在休眠前期使用赤霉素进行处理，则会增加它们的需冷量，加深它们的休眠[3]。可以看出对于不同时期、不同品种的树木，赤霉素所起到的作用不同。王海波在桃树芽的研究中发现，脱落酸与赤霉素都参与了桃芽的休眠，但并非是通过两者各自的单独作用实现的，而是通过它们之间的动态平衡实现的，一旦赤霉素与脱落酸的比值低于某个临界阈值，就会诱导桃芽进入休眠[4]。
DAM基因是一类休眠相关的MADSBOX基因。自从Bielenberg等人[5]发现DAM基因后，DAM基因相继在其他多种植物中被克隆得到，在对多种植物的DAM基因的表达模式进行分析后发现，DAM基因在休眠诱导期表达量逐渐上调，而在休眠解除期表达量逐渐下调[6]。多个研究发现植物休眠有关的重要激素赤霉素与脱落酸的代谢与DAM基因相关。李建召发现脱落酸可以通过冷响应因子CBF间接激活DAM基因的表达[7]。而郇蕾发现，转录因子PpDAM3/PpDAM5能够与作为脱落酸信号正调节子PpAB15结合，进而参与脱落酸信号途径[8]。刘思在对蓝莓花芽的研究中发现，外源脱落酸可以使VcDAM1表达量上调，而外源赤霉素对VcDAM1的表达有抑制作用[9]。牛庆丰发现，脱落酸通过下游因子PpHB22来激活PpDAM1基因，从而诱导了梨花芽休眠的进入[10]。本文通过研究VvDAM2基因对内源脱落酸与赤霉素含量以及合成代谢相关基因的影响，从而探究它们之间的关系。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 植物材料
苹果愈伤组织
1．1．2 菌株和载体
pCAMBIA1302载体，大肠杆菌感受态，LBA4404农杆菌感受态
1．1．3 酶、试剂盒和生化试剂
2× Taq Master Mix，BglII限制性内切酶，SpeI限制性内切酶，T4 DNA连接酶，反转录试剂盒，植物RNA提取试剂盒，胶回收试剂盒，荧光定量PCR试剂盒等。
1．1．4 仪器与设备
PCR仪，电子天平，离心机，恒温金属浴，水浴锅，电泳仪，分光光度计，灭菌锅，C18色谱柱，移液枪等。
1．1．5 其他药品
乙醇，胰蛋白胨，酵母提取物，氯化钠，MS培养基，琼脂，潮霉素，利福平，卡那霉素，羧苄青霉素，甲醇，乙酸等。
1．1．6 引物
表一 荧光定量PCR引物

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