目录
摘要1
关键词1
Abstract2
Key words2
引言3
1材料与方法4
1.1实验材料4
1.2实验方法4
1.2.1 CmARF2基因克隆4
1.2.2 CmARF2超表达载体构建5
1.2.3 农杆菌介导的花粉管通道法侵染拟南芥5
1.2.4 拟南芥T1代播种及阳性植株筛选 5
1.2.5 转基因拟南芥的表型观察6
1.2.6 拟南芥部分开花调控基因表达定量 6
2结果与分析7
2.1 CmARF2基因克隆及序列分析7
2.2系统进化树分析9
2.3 CmARF2转基因拟南芥阳性植株鉴定11
2.4 CmARF2转基因拟南芥表型统计11
2.5 CmARF2转基因拟南芥开花调控基因定量12
3结论13
致谢14
参考文献15
附录A cDNA合成及检测16
附录B 目的片段的纯化回收、连接转化、重组子的筛选与测序17
附录C 3′RACE扩增与5’RACE反应18
附录D农杆菌感受态细胞的制备及转化20
图1 CmARF2基因的PCR扩增8
图2 CmARF2与其他植物种类同源蛋白的多序列比对9
图3不同物种ARF2氨基酸序列的进化树分析10
图4 CmARF2在转基因拟南芥中的RTPCR表达检测11
图5长日照条件下CmARF2超表达转基因拟南芥表型12
图6转基因拟南芥中部分开花调控基因表达量13
表1用于克隆的引物序列5
表2用于阳性植株鉴定与开花调控基因表达定量的引物6
表3系统进化树分析中各物种ARF2的氨基酸序列9
菊花生长素响应因子CmARF2的克隆与功能验证
摘 要
生长素响应因子(auxin response factor, ARF)是一类能够特异结合生长素初期响应基因启动 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: #351916072# 
子中的AuxRE元件而发挥激活或抑制作用的转录因子，在植物生长发育进程中发挥重要作用。为了探究菊花CmARF2基因的调控作用，本研究克隆了菊花CmARF2基因对其功能进行鉴定，分析其在调控开花的过程中发挥的作用。通过设计特异性引物，利用RTPCR等技术克隆了菊花‘神马’生长素响应因子CmARF2基因的cDNA全长，序列分析显示，CmARF2基因全长2842bp，最大的开放阅读框（ORF）为2364bp，该阅读框编码787个氨基酸，推测蛋白质分子量为88.45kD，理论等电点为6.05；氨基酸序列比对发现CmARF2与向日葵HaARF2亲缘关系最近，为78.47%。构建pMDC32CmARF2超表达载体，通过农杆菌介导转化拟南芥，获得异源超表达CmARF2拟南芥株系。观察统计转基因株系的表型，发现异源超表达CmARF2拟南芥株系相比于野生型而言，提早开花，且抽薹1cm时的莲座叶数目减少1.57片。进而对异源超表达拟南芥株系的开花基因进行定量分析，结果显示开花途径促进因子AP1、SOC1、FUL、FT、CO、SPL3、SPL9、SPL10表达量显著上升，开花抑制因子FLC、SVP、FR1、TOE2表达量显著下调。综上所述，本研究初步证明了CmARF2在开花的调控中扮演着重要的作用，对于未来研究调控菊花开花路径提供了理论依据，具有一定的理论和现实意义。

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