月季（Rosa chinensis）原产于我国，是我国十大传统名花之一，也是世界四大切花之首。因其香气宜人、花色丰富、多次连续开花等特征受到人们的喜爱。因为月季一年内多次开花，是极喜光的观赏植物。转录因子HY5不仅促进植物光形态建成和幼苗生长，在激素和代谢途径中的响应作用表明HY5具有多种功能，其在光信号途径调控中扮演非常重要的角色。月季基因组数据，RcHY5基因设计基因全长引物，以月季品种‘月月粉’为实验试验材料，利用RT-PCR等方法扩增获得RcHY5基因的CDS序列501bp, 编码167个氨基酸, 含有一个保守的bZIP特征结构域, 进化相对保守与同科的草莓同源性最高，在一个进化分支上。得到了异源拟南芥过表达株系及hy5突变体回补株系，用于后续试验验证。推测月季RcHY5可能在月季光信号途径中具有非常重要的作用。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言..........4
1材料与方法6
1.1材料 6
1.2方法 6
1.2.1月季品种“月月粉”总RNA的提取..........6
1.2.2 cDNA第一链的合成7
1.2.3 RcHY5引物设计及目的序列扩增....................................7
1.2.4 RcHY5目的基因片段的纯化8
1.2.5 RcHY5构建入门载体..........8
1.2.6连接产物的转化及阳性克隆鉴定8
1.2.7质粒DNA提取.....................9
1.2.8 RcHY5过表达载体的构建................9
1.2.8.1 1AHY5连接载体转化大肠杆菌落PCR鉴定及质粒提取.......................................10
1.2.8.2 RcHY51A重组质粒与pFastR05载体构建.............................................................10
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1.2.9 pFastR05表达载体转化农杆菌........11
1.2.10生物信息学分析................................11
1.2.11拟南芥遗传转化体系的建立11
1.2.12转化拟南芥.......................11
1.2.13转基因拟南芥的筛选与鉴定............11
2结果与分析.......11
2.1 RcHY5基因的克隆与分析.........12
2.1.1 RcHY5全长CDS片段的扩增....12
2.1.2 RcHY5入门载体的构建..................12
2.1.3 RcHY5克隆结果比对分析.............13
2.2 RcHY5结构及进化分析................................................13
2.2.1 RcHY5的结构分析..................13
2.2.2月季RcHY5的氨基酸序列比对分析.........14
2.2.3月季RcHY5基因系统进化分析.................14
2.3 RcHY5基因表达载体的构建与异源拟南芥的转化.....15
2.3.1过表达载体构建. 15
2.3.2 RcHY5回补拟南芥hy5突变体及Col野生型过表达拟南芥. 15
3讨论 15
致谢17
参考文献18
月季RcHY5基因的克隆与进化分析
引言
1月季概况
月季（Rosa chinensis）在蔷薇科蔷薇属中占有非常重要的地位，它所含有的种类非常之多，花型也各异，颜色十分艳丽，香气品种很多，是一个多季开花的优良物种，在我国存在的历史非常久远。我国对月季的育种最早开始于北宋时期，当时的人们开始掌握了扦插繁殖可以保持母本优良性状的应用技术
。据记载，宋代洛阳的很多名园月季名品就有41个之多，可见当时我国月季栽培技术水平是非常之高的可居于世界之最
。
据研究数据统计，现在全世界存在的现代月季品种大约有两万多个品种，而我国的品种资源非常丰富有1000多个品种可查阅。随着最近这些年来科学家在育种方面的努力使得种质资源创新技术飞速提高，种质资源创新使得月季新型品种还不断增加。英国皇家月季协会提出了新型月季的分类法，成为当前广泛推广的的蔷薇属植物园艺分类法。一共分六类：杂种茶香月季（Hybrid Tea Roses），丰花月季（Floribunda Roses），壮花月季（Grandiflora Roses），藤蔓月季（Climbing Roses），微型月季（Miniatures Roses），灌木月季（Shrub Roses）。世界月季联合会将现代月季分为了八个不同类：杂交香水月季（Hydrid Tea Roses），小姐妹月季（Poluantha Roses），多花月季（Flribunda Roses），大型多花月季（Grandiflora Roses），多花香水月季（Floratea Roses），微型月季（Miniature Roses），杂交藤本月季（Climbing Hybrid Roses），杂交蔓性月季（Rambier Roses）。
我国目前对于月季的研究大多数都是围绕着鲜切花保鲜方面展开的。例如，金基石等发现了延长月季切花保鲜期可采用添加抗坏血酸的方法
；张溢等人发现月季切花保鲜时间及效果的改善可使用植物生长调节剂对
；盛爱武等从不同方面对月季切花采后衰老机制进行研究
。此外比较多的就是关于月季生理栽培的研究，包括切花月季、盆栽月季等栽培技术、管理技术的探索。然而在分子育种领域存在明显不足，需要大力发展。

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