目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 菌株、质粒和培养条件2
1.2 主要试剂和仪器3
1.3 构建pLUG220LacZCHL重组质粒3
1.3.1 引物设计3
1.3.2 融合PCR3
1.3.3 构建重组质粒 5
1.3.4 化学转化重组质粒6
1.3.5 鉴定重组质粒6
1.4 构建pLUG220rpoB候选靶位基因LacZ重组质粒7
1.4.1 引物设计7
1.4.2 融合PCR7
1.4.3 构建重组质粒7
1.4.4 化学转化重组质粒7
1.4.5 鉴定重组质粒8
1.5 感受态的制备及电转8
1.5.1 猪链球菌SC070731和Δrss03感受态的制备8
1.5.2 电转化重组质粒8
1.5.3 含重组质粒的SC070731和Δrss03筛选与鉴定8
1.6 通过LacZ翻译融合方法验证rss03的候选靶位基因8
2结果与分析9
2.1 pLUG220LacZCHL重组质粒的鉴定9
2.2 pLUG220rpoB候选靶位基因LacZ融合片段的鉴定10
2.3 pLUG220rpoB候选靶位基因LacZ重组质粒的鉴定10
2.4 含重组质粒的SC070731和Δrss03筛选与鉴定11
2.5 LacZ翻译融合结果12
3 讨论 13
致谢14
参考文献15
猪链球菌小RNA rss03候选靶位的鉴定
摘 要
猪链球菌（Streptococcus suis）是猪的重要致病菌，可引致猪的败血症、脑膜炎等，也可导致生猪从业人员感染和死亡，是一种重要的人畜共患病原菌。细菌小RNA（sRNAs）一般是大小为40 ~ 500 nt的RNA分子，在细菌的基因表达调控过程中发挥着重 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: &351916072& 
要作用，可作为细菌毒力调控的关键调控因子。它能够通过碱基互补配对结合靶位mRNA，从而影响靶位mRNA的转录、翻译或稳定性。本课题组前期研究表明：猪链球菌sRNA rss03与猪链球菌的毒力有关；采用MS2识别序列标签结合RNASeq的方法，筛选出NJAUSS_RS06365、NJAUSS_RS04010和NJAUSS_RS04015等候选靶位基因；经生物信息学预测，rss03可能与上述候选靶位的核糖体结合位点（RBS）区域结合。本课题利用缺失LacZ基因RBS和翻译起始密码子的pLUG220质粒，将强启动子rpoB以及上述候选靶位基因5’非编码区和部分编码框序列（包括与rss03预测的结合位点），分别与LacZ框内融合，构建重组质粒pLUG220rpoBRS06365LacZ、pLUG220rpoB RS04010LacZ和pLUG220 rpoBRS04015LacZ；将上述重组质粒分别导入猪链球菌野生株SC070731和rss03缺失株中，通过检测β半乳糖苷酶活性，明确这三个基因为rss03的直接靶位。研究结果为进一步揭示rss03调控靶位和猪链球菌毒力机制提供参考。

原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/dwyx/605302.html