目录
摘 要 II
关键词 III
ABSTRACT III
KEY WORDS III
绪论 1
1 材料与方法 2
1.1 细胞和病毒株及主要材料 2
1.2 引物设计 3
1.3 仪器和设备 3
1.4 SPV的增殖及DNA的提取 3
1.5 SPV071基因的扩增 4
1.6 原核表达载体的构建及诱导表达条件优化 4
1.7 表达产物的纯化 5
1.8 SPV抗体间接ELISA检测方法的建立 6
1.8.1 间接ELISA常规操作步骤 6
1.8.2 抗原最适包被浓度与血清最佳稀释度的确定 6
1.8.3 临界值的确定 6
1.8.4 交叉反应试验 6
1.8.5 重复性试验 7
1.9 临床样品检测 7
2 结果与分析 7
2.1 构建SPV071蛋白原核表达载体 7
2.2 重组蛋白的纯化与表达条件优化 8
2.3 SPV抗体间接ELISA检测方法的建立 8
2.3.1 抗原最适包被浓度与血清最佳稀释度的确定 9
2.3.2 临界值的确定 9
2.3.3 交叉反应试验 9
2.3.4 重复性试验 10
2.4 临床样品检测 10
3 讨论 10
致谢 11
参考文献： 12
猪痘病毒血清抗体检测方法的建立
摘 要
为了建立猪痘病毒血清抗体间接ELISA检测方法，参考猪痘病毒SPV071基因序列设计1对引物，从本实验室SPV临床分离毒株（NT1501）的PK15细胞培养物中扩增到1075pb的SPV071基因并进行测序，结果条带与预期基本一致。将PCR扩增产物纯化后与表达载体pET32a连接，筛选出重组质粒pET32a071后进行BamH I和Hind III双酶切，构建重组质粒转入宿主菌培养，并收集培养物，通过 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: #351916072# 
不同浓度IPTG诱导和不同诱导时间下发现，在1mmol/L浓度的IPTG，诱导时间为6h时蛋白表达量最高。用蛋白纯化试剂盒对SPV071重组蛋白进行纯化，以纯化的重组蛋白为检测抗原，建立了SPV抗体间接ELISA检测方法。本研究建立的猪痘病毒血清抗体间接ELISA检测条件为：重组蛋白包被浓度为2μg/mL，猪血清稀释度为1:200。以建立的间接ELISA检测方法对我国华东地区采集的2589份临床猪血清样品进行抗体检测，结果显示猪血清抗体平均阳性率为4.6%，表明猪痘病毒在我国华东地区部分猪场有感染，但未造成大范围流行，试验结果有助于我国当前猪痘病毒流行病学调查。

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