目录
摘要Ⅱ
关键词Ⅱ
AbstractⅢ
引言
引言1
1文献综述1
1.1经典猪瘟概述1
1.2猪流行性腹泻概述2
1.3猪繁殖与呼吸综合征概述3
1.4研究目的及意义4
2实验设计5
2.1 rRTPCR的初步建立5
2.1.1确定靶基因5
2.1.2序列比对5
2.1.3设计引物和探针5
2.1.4验证引物特异性5
2.2多重rRTPCR的初步建立6
2.2.1多重RTPCR引物要求6
2.2.2多引物序列分析6
3结果与分析6
3.1 rRTPCR的初步建立6
3.1.1确定靶基因6
3.1.2序列比对7
3.1.3设计引物和探针9
3.1.4验证引物特异性9
3.2三对引物进行多重rRTPCR的可能性分析10
4讨论11
致谢14
参考文献15
附录1 CSFV的序列比对结果17
附录2 PRRSV的序列比对结果19
附录3 PEDV的序列比对结果21
检测经典猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒的rRTPCR方法的初步建立
摘 要
经典猪瘟、猪流行性腹泻、猪繁殖与呼吸综合征是常见于全球养猪国家及地区的病毒性传染病，对养猪产业造成了极大的损失。本文简要概述了三种疫病，并设计了针对三个病毒靶基因的引物和探针，包括目的基因的选择，基因的比对，特异性引物设计和多重引物的分析等。经过分析，CSFV、PEDV、PRRSV三种病毒分别选择了5 NTR、N基因和ORF7基因的保守区域作为引物设计的模板，设计出的引物和探针经软件模拟，无非特异性的扩增。但是作为三种病毒多重rRTPCR的引物，还需进一步改进。
PRELIMINARY ESTABLISHMENT OF REALTIME RTPCR FOR DETECTION OF CLASSIC *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: &351916072& 
AL SWINE FEVER VIRUS, PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA VIRUS, PORCINE REPRODUCTIVE AND RESPIRATORY SYNDROME VIRUS
ABSTRACT
Classical swine fever, porcine epidemic diarrhea, porcine reproductive and respiratory syndrome are common viral infectious diseases in most countries around the world, causing great losses to pig farming. In this paper, the three kinds of epidemic diseases were briefly summarized, and primers and probes for their target genes were designed, including the selection of target genes, gene alignments, specific primer design and analysis of multiple primers. Through analysis, I selected the conserved regions of CSFV s 5 NTR, PEDV s N gene and PRRSV s ORF7 gene respectively as the templates of primer design, and the designed primers and probes were simulated by software, showing nonspecific amplification. But as primers for multiple rRTPCR of three viruses, further improvement is needed.
KEY WORDS：CSFV; PEDV; PRRSV; rRTPCR; primers
经典猪瘟(classical swine fever，CSF)、猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）、猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）都是在全球养猪国家及地区常见的猪病，三者的致病病原都为有囊膜的单股正链RNA病毒，毒株毒力有强弱之分，致病性常因宿主年龄、免疫状态以及毒株毒力不同而有差异。这三种病都对全球的养猪产业造成了极大的损失，因此，了解三种病的研究现状，建立快速准确的诊断方法，实施综合的防控措施，降低猪群发病率，对于猪场的健康发展，是很有必要的。

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