目录
摘要II
关键词II
AbstractIII
引言
引言1
1材料与方法4
1.1材料4
1.1.1细胞、血清和主要试剂4
1.2.2仪器设备4
1.2.3主要溶液配制5
1.2.4 5’UTR参考毒株信息5
1.2.5引物信息6
1.2牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定 6
1.2.1病料的来源及处理6
1.2.2 RTPCR检测7
1.2.3片段回收8
1.2.4 MDBK细胞的复苏与培养8
1.2.5 MDBK细胞的传代8
1.2.6病毒的分离9
1.2.7病毒TCID50测定9
1.3遗传演化分析 9
2 结果与分析10
2.1 5’UTR PCR扩增结果10
2.2病毒分离培养结果10
2.3病毒毒价测试结果10
2.4 BVDV 5’UTR基因的同源性分析结果11
3讨论14
致谢15
参考文献16
牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及遗传演化分析
摘 要
牛病毒性腹泻病毒是牛病毒性腹泻（粘膜病）和犊牛呼吸道综合征的主要病原，对养殖业危害严重。课题通过前期收集临床腹泻样本，开展病毒的核酸检测，检测的阳性病料接种MDBK细胞，分离得到一株毒株，命名为YNF12。感染细胞盲传三代后引起出现皱缩、脱落、死亡等病变现象。毒价测定YNF12的TCID50为105.39/0.1mL。核酸的同源性分析比对显示YNF12的5’UTR序列与BVDV1a型的NADL株（Genbank：NC_001461）核苷酸同源性最高。通过以上的研究，进一步丰富了BVDV流行株的基因型分布数据，为牛病毒性腹泻病毒的病原学研究提供参考。
Isolation, identification and genetic evolution of Bovine Viral Diarrhea Virus
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Bovine viral diarrhea virus is the main pathogen of bovine viral diarrhea (mucosal disease) and calf respiratory syndrome, which is harmful to the breeding industry. In this project, we collected clinical diarrhea samples, carried out nucleic acid detection of virus, inoculated MDBK cells with positive materials, and isolated a strain named ynf12. After three generations of blind transmission of infected cells, shrinkage, abscission, death and other pathological changes occurred. TCID50 of ynf12 was 105.39/0.1ml. The nucleotide homology analysis showed that the 5 UTR sequence of ynf12 had the highest homology compared with that of bvdv1a NADL strain (Genbank: NC_001461). Through the above research, the genotypic distribution data of BVDV epidemic strains are further enriched, which provides a reference for the etiology research of bovine viral diarrhea virus.
KEY WORDS：BVDV; Isolation and identification; Virulence measurement; Genetic evolution analysis
引言
牛病毒性腹泻（粘膜病）（Bovine viral diarrhoea/Mucosal disease，BVD/MD）的病原为牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV），该病毒对牛群尤其是幼龄牛危害极大。其传播方式较为广泛，即可垂直传播也可水平传播，主要通过鼻液、尿液、粪便、乳汁、唾液等方式。在临床症状复杂多变，包括呼吸道、胃肠道和生殖类疾病。同时大部分成年牛也可以呈隐性感染，带毒却无任何临床症状。此外，胎儿在母体子宫内感染BVDV可导致免疫耐受，出生后成为感染源，形成持续感染（PI），释放大量病毒，不断地感染其他易感动物[1]。该病毒在全球范围内都有分布，对经济造成严重影响。

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