目录
摘要 II
关键词 II
ABSTRACT III
KEYWORDS III
引言 1
1 材料与方法 1
1.1 材料 1
1.1.1 菌株 1
1.1.2 主要试剂与仪器 1
1.2 实验方法 2
1.2.1 Lys0643的诱导表达 2
1.2.2 Lys0643的纯化与超滤 2
1.2.3 SDSPAGE分析 3
1.2.4 裂解酶lys0643抗菌活性测定 4
1.2.5 裂解酶Lys0643酶活性质测定 5
1.2.6 链球菌裂解酶生物信息学研究 5
2 实验结果 6
2.1 裂解酶Lys0643的表达与纯化 6
2.2 裂解酶Lys0643杀菌活性分析 7
2.3 裂解酶Lys0643酶活性质分析 8
2.3.1 Lys0643的最佳浓度 8
2.3.2 温度对噬菌体裂解酶Lys0643酶活性质分析 8
2.3.3 pH对裂解酶Lys0643酶活性质影响 9
2.3.4 NaCl离子强度和EDTA对裂解酶Lys0643酶活性质分析 9
2.3.5 链球菌裂解酶生物信息学分析 10
3 讨论 13
致谢 14
参考文献 16
无乳链球菌裂解酶Lys0643的裂解活性分析
摘要
无乳链球菌宿主广泛，可感染人类和多种动物，是一种重要的病原菌。无乳链球菌通过引起奶牛乳腺炎而导致产奶量和质量下降，通过入侵鱼类的脑部、肝脏或脾脏而导致鱼类死亡，这给奶牛和鱼类养殖业造成巨大经济损失。近年来，噬菌体及其裂解酶作为治疗细菌感染的抗生素替代品，展现出巨大的应用潜力。裂解酶是在噬菌体裂解周期结束时表达的肽聚糖水解酶，促进宿主细胞裂解和子代噬菌体的释放，在体外应用时可以直接裂解杀死细菌。裂解酶相对于噬菌体更有优势，比如更广的裂解谱、不易产生噬菌体诱导抗性、更易基因工程改造等。我们在一株鱼源无乳链球菌GD201008001中发现一个潜 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ^351916072^ 
在的裂解酶Lys0643，前期已构建好克隆表达菌株。在本实验中，我们用镍柱纯化了该裂解酶Lys0643，之后通过浊度法和透射电镜观察，证明了该裂解酶对无乳链球菌有较强的杀菌作用。体外酶活试验表明，当pH在69，温度在455℃时，该裂解酶均能发挥裂解作用，且离子浓度对该裂解酶活性也没有影响。此外，通过对链球菌裂解酶生物信息学分析，预测裂解酶的结构域，构建遗传进化树，发现Lys0643与已报道的链球菌裂解酶最高同源只有29%，裂解酶Lys0643有其独特性，值得深入研究。本研究表明，裂解酶Lys0643能为无乳链球菌的治疗提供一种新的方法。

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