目录
摘要Ⅱ
关键词Ⅱ
AbstractⅢ
Key wordsⅢ1.绪论1
1.1 丙型流感病毒1
1.2 丁型流感病毒2
1.3 流感病毒检测方法2
1.4 多重荧光定量PCR3
2 材料与方法4
2.1 材料4
2.1.1病毒株及临床样品 4
2.1.2 主要试剂和仪器 4
2.2 方法4
2.2.1 引物和探针的设计与合成4
2.2.2 病毒核酸的提取以及反转录5
2.2.3 重组质粒的构建5
2.2.4 质粒标准曲线的建立6
2.2.5双重荧光定量PCR扩增反应条件的优化6
2.2.6 双重荧光定量PCR灵敏度试验6
2.2.7 双重荧光定量PCR特异性试验7
2.2.8 双重荧光定量PCR共感染模拟试验7
2.2.9 双重荧光定量PCR稳定性试验8
3 结果与分析8
3.1 重组质粒的构建8
3.2质粒标准曲线的构建8
3.3最佳扩增反应体系9
3.4 双重荧光定量PCR灵敏度试验结果9
3.5 双重荧光定量PCR特异性试验结果11
3.6 双重荧光定量PCR共感染模拟试验结果12
3.7 双重荧光定量PCR稳定性试验结果13
4 讨论 14
致谢15
参考文献16
新发丁型流感和丙型流感的双重荧光定量
PCR检测方法的构建
摘 要
流行性感冒病毒根据核蛋白和机制蛋白的抗原性不同分为甲、乙、丙、丁四型。丙型流感病毒（Influenza C virus，ICV）和丁型流感病毒（Influenza D virus，IDV）具有约50%的同源性，且无抗体交叉性。ICV首先在人群和猪群中被发现，后来也在牛群中出现，其在人群与猪群间可能存在种间传播。IDV作为新发流感病毒首先在猪群中发现，牛是其天然宿主，并且血清学证据证明其有感染人的可能性。两 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ^351916072^ 
种病毒的跨宿主传播能力以及更广的宿主范围使其对畜牧业和公共卫生具有较高的潜在威胁。但是目前对两种病毒的监测和研究仍较少，所以建立一种针对ICV和IDV的简便、高效、经济的双重检测方法，对于进行病毒检测和预防监测具有重要意义。而多重实时荧光PCR方法适用于针对多病原的快速检测。
为了建立能够检测ICV和IDV的双重实时荧光定量PCR检测方法，本研究参照GenBank中登录的ICV和IDV的基因序列设计合成两组引物和TaqMan探针并构建了用于评估该检测方法的ICV和IDV的重组质粒，从而对该检测方法的性能进行评估。结果显示，该检测方法具有良好的稳定性和特异性，对每种病毒的检测灵敏度可以达到1×101 拷贝每微升，并且可针对混合感染样品进行鉴别检测。试验表明该方法适用于ICV和IDV的临床检测，对于监测ICV和IDV具有重要意义。

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