目录
摘要III
关键词III
AbstractIV
引言
引言1
1 材料与方法1
1．1 主要试剂1
1．2 主要仪器2
1．3 溶液配制2
1．4 抗体配对实验2
1．5 捕获抗体和检测抗体最佳稀释度的选择2
1．6 捕获抗体最佳包被条件的选择3
1．7 抗原最佳孵育时间的选择3
1．8 检测抗体最佳孵育时间的选择3
1．9 TMB最佳显色时间的选择4
1．10 夹心ELISA阴阳临界值的确定4
1．11 交叉感染实验4
1．12 敏感性和特异性实验4
2 结果4
2．1 抗体配对结果4
2．2 捕获抗体与检测抗体最佳稀释度的确定5
2．3 捕获抗体最佳包被条件的确定5
2．4 抗原最佳孵育时间的确定5
2．5 检测抗体最佳孵育时间的确定6
2．6 TMB最佳显色时间的确定6
2．7 双抗夹心ELISA特异性、敏感性及交叉反应性的鉴定7
3 讨论7
致谢9
参考文献10
捻转血矛线虫HcBLAODA双抗夹心
ELISA检测方法的建立
摘要
捻转血矛线虫病是反刍动物一种常见的消化道寄生虫病，对牛羊养殖危害巨大，建立有效的诊断方法对该病的防控具有重要意义。研究表明捻转血矛线虫感染动物后会排泄/分泌多种蛋白分子，其中包含生物素脂酰结合酶和2草酸脱氢酶酰基转移酶（Biotin lipoyl attachment and 2oxoacid dehydrogenase acyltransferase，BLAODA）。本文以BLAODA作为待检抗原，用抗BLAODA单克隆抗体建立了双抗体夹心ELISA诊断方法。对该ELISA方法进行了优化，确定了包被抗体的最佳稀释度、最佳包被时间、酶标抗体最佳孵育时间、待检抗原最佳孵育时间等条件。用该方法对已知样品进行检测，其特异性和 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ￥351916072￥ 
敏感性均在90.6%以上。
Establishment the sandwich ELISA for detection of HcBLAODA in Haemonchus contortus infection
ABSTRACT
Haemonchus contortus, a gastrointestinal bloodsucking parasite, causes great losses to the sheep industry. An effective method for diagnosis of the infection would be important in prevention and control of this parasitic disease. In previous study, it was found that Biotin lipoyl attachment and 2oxoacid dehydrogenase acyltransferase (BLAODA) was an excretion and secretion protein of H. contortus. In this study, a sandwich ELISA based on monoclonal antibody against BLAODA was established. The dilution of capture antibody, coating time, incubation time for antigen (samples) and HRP Antibody were optimized. The sandwich ELISA was applied in samples detection, the results indicated that the specificity and sensitivity of this method are 90.6%.
KEY WORDS：Haemonchus contortus；BLAODA； Sandwich ELISA
引言
捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）属于毛圆科(Trichostrongylidae)血矛属(Haemonchus)线虫[1]，雌虫红色的消化道与白色的生殖器官相互缠绕在一起[2]，是其重要的鉴别特征之一。寄生于牛羊等反刍动物第四胃，虫体平均每天能够吸取宿主30mL的血液[3]，引起宿主贫血、水肿、腹泻甚至死亡。由于其生活史的特点，该病常有”春季大爆发“的现象[4]，给我国养羊业造成巨大危害[5]。捻转血矛线虫病主要使用左旋咪唑（Levamisole）、阿苯达唑（Albendazole）和伊维菌素（Ivermectin）等[6]药物进行防治，然而有研究称[7,8]不规范的用药加速了捻转血矛线虫耐药性虫株的产生和蔓延。虽有一个商品化的疫苗用于捻转血矛线虫病的预防，但因其成本高，国内基本无应用，仅在澳大利亚部分牧场使用。因此，准确快速的诊断该病、选择恰当的药物尽早治疗、避免感染后期成虫产生虫卵污染草场和圈舍[9]，这对该病的防控具有非常重要的作用，同时也是将该病损失降至最低的最为有效的措施。

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