本实验的内容旨在研究于过氧化氢（H2O2）处理诱导氧化应激模型中，芦丁对于鸡肝细胞是否能够进行有效保护，并且对其中涉及的作用机制进行初步探讨。本实验方法是用过氧化氢诱导鸡肝细胞氧化应激模型，并将细胞分为五个组，即对照组、过氧化氢诱导组、低剂量芦丁组、中等剂量芦丁组、高剂量芦丁组，用相关仪器设备与试剂盒检测每组细胞存活率以及细胞氧化应激产物，同时，再检测BAX，Caspase-3、Bcl-2蛋白表达水平。根据实验结果可以较为清楚地看出，对于鸡肝细胞，过氧化氢确实能够引起其氧化应激损伤，在过氧化氢诱导的氧化应激模型中，不同剂量的芦丁能够增加细胞存活率，且剂量越高，存活率也越高。随着芦丁剂量的增加，每组细胞产生的MDA、ROS的量明显减少，而CAT的含量下降。同时，Caspase-3与BAX的含量随芦丁剂量的增加而减少，Bcl-2则与之相反。这些结果都具有统计学意义（p<0.05）。从中可以得之，芦丁能够有效降低鸡肝细胞受到的氧化应激损伤，这其中的作用机理可能是芦丁活化了某些细胞信号通路并且消除了部分自由基。由此可以看出，芦丁可以有效地运用于鸡养殖的生产实践之中，且效果十分显著。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 2
引言 2
1 材料及方法 2
1.1 材料 2
1.1.1 主要材料 2
1.1.2 主要仪器 3
1.2 方法 3
1.2.1试验分组 3
1.2.2细胞存活率实验 3
1.2.3细胞MDA、CAT、ROS检测 3
1.2.4 Bcl2、Caspase3、BAX蛋白水平检测 3
1.2.5统计学分析 4
2.结果与分析 4
2.1 不同剂量的芦丁对过氧化氢处理后的鸡肝细胞存活率的影响 4
2.2不同剂量的芦丁对过氧化氢处理后的鸡肝细胞氧化应激产物的影响 4
2.3不同剂量的芦丁对过氧化氢处理后的鸡肝细胞Bcl2、Caspase3、BAX蛋白水平表达的影响 5
3.讨论 5
3.1芦丁对过氧化氢处理后的鸡肝细胞存活率的影响  *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: ￥351916072￥ 
6
3.2芦丁对过氧化氢处理后的鸡肝细胞氧化应激产物的影响 6
3.3芦丁对过氧化氢处理后的鸡肝细胞Bcl2、Caspase3、BAX蛋白水平表达的影响 7
致谢 7
参考文献 7
芦丁缓解鸡肝细胞氧化应激及其作用机制
引言
引言：芦丁，又称为维生素P，具有水溶性，其存在于自然界的多种植物当中，比如苦瓜、南瓜、槐米等[1]，可以说其来源十分广泛，其在天然植物中的作用主要是防止植物中的维生素C受到氧化而破坏，由此可以看出，芦丁的抗氧化能力十分出众，是维生素C的优质协同剂[2]，并且在临床中，被用于防止高血压、脑溢血等疾病（槐米对微粒体和神经细胞氧化损伤的保护作用）。近些年来，许多报道发现了芦丁抗氧化作用十分明显，它可以消除细胞中的自由基，并且能够有效减少细胞中过氧化物的生成，对细胞进行有效地防护，减少细胞受到的氧化损伤[3]。近年来，有许多关于芦丁降低细胞受到氧化应激损害的研究，这些研究发现，芦丁能够保护多种细胞，例如人的晶状体细胞。
据相关研究表明，适量的活性氧，对于细胞是必须的，当活性氧的含量适中的时候，它可以通过细胞信号通路，调节细胞的各种生理活动，它的这种作用是其他物质所不能替代的，并且，在这种情况之下，活性氧的产生以及消灭能够维持在一个相对平稳的水平[4]。可是物极必反，当动物体内的一些活性较高的物质产生量过大时，在此种情况下，机体十分容易出现氧化与抗氧化之间极度不平衡，这时候，活性氧对机体的损害作用开始凸显，它会损伤细胞的蛋白质膜结构，甚至会损伤细胞中，特别是线粒体和细胞质中的DNA，因此，在这种情况之下，便会由细胞发展到组织，再到器官，造成某些器官的氧化应激损伤，使得动物个体的健康造成十分严重的影响。这其中以活性氧损伤尤甚（例如H2O2）。在在养殖生产实践中，氧化应激往往会提高畜禽的死亡率[5]，给养殖从业者造成一定经济损失。
肝脏是鸡的重要代谢器官，氧化代谢十分频繁，并且极其旺盛，在这种情况之下，鸡的肝脏细胞极易发生氧化代谢损伤[6]。因此，在鸡养殖的生产实践中，要十分注重对鸡肝脏的保护，减少其受到的氧化应激，而这其中较为有效地方法，就是让鸡摄入天然抗氧化物质，这些抗氧化物质要成本较低，且无毒无害。因此，本实验采用过氧化氢和鸡肝脏细胞（选用鸡肝脏原代细胞），构建体外细胞氧化应激模型，选用芦丁这种在自然界广泛存在，对鸡的机体无毒无害的物质作为抗氧化剂进行处理，研究其对鸡肝脏细胞在受到氧化应激是的保护作用，从而探究其是否能够用于鸡的生产实践之中。
1材料及方法
1.1材料
1.1.1 主要材料产蛋初期罗曼鸡肝细胞（由实验室自行提供），芦丁（陕西瑞林帕尼尔生物科技有限公司，纯度95%），PBS溶液、双氧水（1.65mmol/L）、RIPA蛋白裂解液、2 mol/LKOH溶液、2mol/LDMSO、BCA试剂盒、cck8试剂盒，丙二醛（MDA）试剂盒，过氧化氢酶（CAT）试剂盒，活性氧（ROS）试剂盒、细胞完全培养基、bcl2、 bax、caspase3一抗以及对应二抗。
1.1.2主要仪器酶联免疫检测仪、超净台、细胞培养箱、匀浆器、台式离心机
1.2 方法
1.2.1试验分组取足够多的细胞，放到细胞计数板上进行计数，放到三十七摄氏度，CO2量为5%的培养箱中进行培养，每六个小时进行一次培养液更换，共培养24小时，用以消除其他因素对实验的影响。本实验分为五个大组，五个大组使用不同剂量的过氧化氢和芦丁进行处理，这五个大组分别为空白对照组，过氧化氢诱导组（1.65mmol/LH2O2）,低剂量芦丁组（1.65mmol/L H2O2+5 μmol/L 芦丁）,中等剂量芦丁组（1.65mmol/L H2O2+10μmol/L 芦丁）,高剂量芦丁组（1.65mmol/L H2O2+20μmol/L 芦丁）。这五个大组之中，每个大组设置3个重复。
1.2.2细胞存活率实验将鸡肝细胞按照约4x10^8个/L的量接种于96孔板中，按上述试验分组方式进行分组，并按上述提到的试剂剂量处理细胞，每组设置3个重复组，每组细胞在培养二十四小时后，把已经使用过的培养基吸干，每个孔中加入含有10μLCCK8试剂的完全培养基，加入的总量为试剂的10倍的体积，即每个孔加入100μL，之后把细胞放到三十七摄氏度，CO2含量5%的培养箱中进行培养孵化两个小时，时间到后取出，将细胞放到450nm的酶联免疫检测仪之下测定每组的吸光度值，将每组吸光度值准确记录，采用的计算方法为：用每组测得的吸光光度值除以空白对照组吸光光度值表示细胞存活率，用公式表示为：每组细胞存活率=每组OD值/空白对照组OD值。

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