目的探讨姜黄素对蛋白限饲小鼠卵巢类固醇激素合成的影响。方法选用24只妊娠小鼠，共分为4个处理组标准日粮组（NP）、低蛋白日粮组(LP)、低蛋白日粮＋100 mg/Kg姜黄素组(LPL)、低蛋白日粮＋400 mg/Kg姜黄素组(LPH)。从妊娠D 1.5供给各处理日粮，直到妊娠D 19.5颈部放血处死母鼠，剖腹取卵巢，用苏木精-伊红染色卵巢组织切片，观察卵巢形态学变化。荧光定量PCR检测卵巢StAR、3β-HSD、17β-HSD、和CYP19A1基因的表达。结果1）与对照组相比，LP、LPL和LPH组卵巢切片黄体数量显著下降。2）与对照组相比，LP、LPL和LPH组StAR、3β-HSD、17β-HSD、和CYP19A1的基因表达水平显著下降（P < 0.05）。结论姜黄素对蛋白限饲介导的妊娠小鼠类固醇合成酶表达水平的下降无明显改善作用。
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract 3
Key words 3
引言 3
1 材料与方法 5
1.1 药物及主要试剂 5
1.2 试验动物与分组处理 5
1.3 苏木精伊红染色 5
1.4 Realtime PCR法测定相关基因表达 6
1.4.1 总RNA提取 6
1.4.2 反转录 6
1.4.3 Realtime PCR 6
1.5 统计学分析 7
2 结果与分析 7
2.1 姜黄素对蛋白限饲妊娠小鼠卵巢形态的影响 7
2.2.1 姜黄素对蛋白限饲妊娠小鼠卵巢类固醇激素StAR基因表达的影响 7
2.2.2 姜黄素对蛋白限饲妊娠小鼠卵巢类固醇激素3βHSD基因表达的影响 8
2.2.3 姜黄素对蛋白限饲妊娠小鼠卵巢类固醇激素17βHSD基因表达的影响 8
2.2.4 姜黄素对蛋白限饲妊娠小鼠卵巢类固醇激素CYP19A1基因表达的影响 9
3 讨论 10
3.1 姜黄素对蛋白限饲妊娠小鼠卵巢形态的影响 10
3.2 姜黄素对蛋白限饲妊娠小鼠卵巢类固醇激素合成酶的影响 10
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姜黄素抗氧化作用的应用前景 12
致谢 12
参考文献 12
母体灌胃姜黄素对蛋白限饲小鼠卵巢类固醇激素合成的影响
动物科学 齐茜
引言
氧化应激的产生是由于氧化物与生物抗氧化物之间的平衡的遭到破坏，使得活性氧浓度升高。并且高浓度活性氧会损害细胞中的核酸、蛋白质和脂类，造成细胞结构和功能受损，严重时甚至会导致细胞死亡[1]。在众多不同的生殖状态下都存在氧化应激，比如卵母细胞成熟、卵子发生、子宫内膜异位症、死精症及精子DNA损伤、弱精症、输卵管积水等[2]。近些年，氧化应激逐渐成为妊娠相关疾病的关键致病因素[3]。致使机体产生氧化应激反应的是活性氧自由基（ROS），ROS是包括过氧化物、自由基和氧离子在内的一组氧化物。ROS在各种环境中均可产生，包括细胞内和细胞外，在细胞内ROS产生于细胞色素p450体系、微粒体、线粒体和膜NADPH氧化酶[4]。Kumar等[5]研究结果表明， ROS浓度过高会引起线粒体中核酸DNA发生突变，致使线粒体功能发生障碍，这进而会使得由线粒体氧化磷酸化所导致的ATP含量下降，并危及卵子发生，降低卵泡数量。当组织发生氧化应激时，细胞中对应的氧化产物MDA含量就会升高，进而会严重影响卵巢颗粒细胞的类固醇激素的生成[6]，进而导致组织器官功能受损。有研究表明，氧化应激可以致使卵母细胞发生凋亡，同时会提高没有受精的卵母细胞二倍体发生率，另外还会使染色体结构发生改变、胚胎凋亡增加等[7]。妊娠是一个极其精密的孕育新生命的过程，这一过程的顺利进行需要良好的营养作为支撑。有相关研究表明，妊娠期营养状况不仅影响母体情期表现，也直接影响胚胎的生长发育和成年后的健康状况[8, 9]。在整个妊娠期中，妊娠后期尤为重要，这一时期时胎儿机体组织发育较快，对养分需要量大幅度增加。He[10]等研究发现后代羔羊的抗氧化能力与妊娠后期母羊饲粮的能量、蛋白质水平有关，若母羊妊娠后期的能量、蛋白质水平受限，则羔羊抗氧化能力下降。
类固醇激素在机体稳态的调节过程中对生物体能量代谢和生殖调控系统具有重要意义[11]。性激素可以维持生殖内分泌系统正常，其中卵巢所分泌的关键类固醇激素包括雌激素（estrogen）、孕酮（progesterone）和少量的雄激素（androgen）。类固醇调节基因在维持黄体功能、保证卵泡类固醇激素的稳态并且对卵巢发育和卵泡发生具有重要的作用[12]。在卵巢类固醇的生成过程中，涉及了胆固醇的吸收、合成、转运，类固醇的活动增强，同时，将其转变为孕酮的酶的表达量明显增加，这些酶包括：3β羟基类固醇脱氢酶（3βHSD）、编码cAMP依赖的蛋白激酶C（PKA）、细胞色素P450胆固醇侧链裂解（P450scc）酶和类固醇合成急性调节蛋白（StAR）。
姜黄素是一种酚类色素，主要从植物姜黄根茎中提取出来的，其作用非常广泛，具有抗衰老、抗炎、抗氧化和抗肿瘤等作用。在最近几年，大量体外和体内试验表明，姜黄素可以直接地抑制卵巢癌变细胞的生长和增殖，同时还会诱导其凋亡[7, 1315]，王晓宁等研究发现，姜黄素可以使小鼠卵巢组织中氧化产物的含量下降，同时提高了抗氧化酶的浓度，减缓组织结构功能的损伤，降低氧化应激反应[4]。因此，我们预设在小鼠饲粮中添加姜黄素可以降低蛋白限饲小鼠卵巢的氧化损伤。本研究旨在探讨妊娠期每日灌胃姜黄素对低蛋白饮食诱导的小鼠卵巢类固醇激素合成的影响，为姜黄素在动物生产实践应用中提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 试剂及主要仪器
姜黄素（纯度> 98 ％）（科虎生物技术研究开发中心，中国广州）、橄榄油（Olivoila，中国深圳）、APES粘片剂、石蜡、伊红、苏木精、乙醇、二甲苯。反转录试剂盒、SYBR Rremix Taq荧光定量酶：TaKaRa。
试验所用主要仪器如表1
表1 试验中使用的仪器
Table 1 Instruments applied in experiments
名称
公司名称（型号）
真空干燥箱
上海新苗医疗器械制造有限公司
光学显微镜
日本Nikon（YS100）
高压灭菌锅
上海申安医疗器械厂

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