日粮中的营养成分如蛋白质、脂肪等进入胃肠道后，可被肠道内分泌细胞上的感应体识别进而诱导胃肠激素分泌，这些激素通过肠神经将营养信号传递至大脑，进而调节机体营养物质的吸收与代谢。CaSR是目前已知的一种营养素感应体，在胃肠道中广泛表达。CaSR可以通过感应多肽，促进胃肠激素分泌，进而调控机体采食。大豆蛋白作为日粮中重要的蛋白质来源，在经过胃水解后形成大豆蛋白水解物（SPH）。本研究旨在探讨大豆蛋白水解物对小鼠采食、CCK分泌的影响，并探究CaSR是否参与介导该过程，为研究营养素、营养感应受体与胃肠激素分泌的关系提供思路。试验以小鼠为试验对象，采用体内灌胃技术，用不同浓度的大豆蛋白水解物，钙敏感受体（CaSR）抑制剂对小鼠灌胃，测定小鼠采食量，采集小鼠血液检测胆囊收缩素浓度，并采集小鼠十二指肠黏膜采用RT-PCR技术分别测定与CaSR、PepT1、GPR93相关的mRNA水平。结果发现，1.5g/kg的SPH显著降低小鼠1h内的采食量（P＜0.05），添加CaSR抑制剂后小鼠1h内的采食显著降低（P＜0.05），而且添加CaSR抑制剂后小鼠1h内CCK的分泌显著降低（P＜0.05），灌胃SPH显著提高了CaSR的基因表达（P＜0.05）。综上所述，一定浓度的大豆蛋白水解物促进CCK分泌，降低小鼠采食量，该过程可能是大豆蛋白水解物通过上调十二指肠中的CaSR基因表达进而促进胃肠激素CCK的分泌。
目录
摘要 2
关键词 3
Abstract 3
Key words 4
引言 5
1 材料与方法 6
1.1 试剂和仪器 6
1.2 试验设计 7
1.3 测定指标及方法 9
1.4 数据统计与分析 9
2 结果与分析 9
2.1 大豆蛋白水解物对小鼠采食的影响 9
2.2 钙敏感受体抑制剂对小鼠采食的影响 9
2.3 钙敏感受体抑制剂对小鼠CCK分泌的影响 10
2.4 大豆蛋白水解物对十二指肠钙敏感受体、寡肽转运体和G蛋白偶联受体基因表达的影响 11
3 讨论 11
4 结论 12
致谢 12
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12
大豆蛋白水解物刺激CCK分泌对小鼠采食的调节
引言
中英文缩略词对照表
英文缩写
英文全称
中文全称
EECs
Enteroendocrine cells
肠道内分泌细胞
SPI
Soy protein isolate
大豆分离蛋白
SPH
Soy protein hydrolysates
大豆蛋白水解物
CCK
Cholecystokinin
胆囊收缩素
GLP1
Glucagon⁃like peptide 1
胰高血糖素样肽1
GIP
Gluco⁃indµlinotropic peptide
葡萄糖促胰岛素肽
PYY
Peptide tyrosine tyrosine
酪酪肽
AC
Adenylate cyclase
腺苷酸环化酶
PKC
Protein kinase C
蛋白激酶C
PKA
Protein kinase A
蛋白激酶A
DMH
Dorsmedial hypothalamus
丘脑背内侧核
AP
Area postrema
最后区
PLC
phospholipase C
磷脂酶C
CaSR
Calcium sensitive receptor
钙敏感受体
NPS2143
CaSR抑制剂
PepT1
peptide transporter 1
寡肽转运体
GPR93
G protein coupled receptor 93
G蛋白偶联受体
L Arg
Larginine
L精氨酸
LTrp
Ltryptophan
L色氨酸
LPhe
Lphenylalanine
L苯丙氨酸
引言
胃肠道是机体最大的消化器官与内分泌器官[1]。机体摄入的食物在胃肠道被消化后形成小分子营养物质，这些营养素不仅可以被吸收利用参与能量代谢，也可以刺激胃肠道中的内分泌细胞分泌胃肠激素，进而调节多种机体活动。研究表明，与同等能量的碳水化合物和脂肪相比，摄入等能量的蛋白质能够有效地影响机体的饱腹感[2]。蛋白质及其水解物作为日粮的重要营养成分，可以通过胃肠道上的内分泌细胞的营养感应体（如CaSR等）诱导胃肠饱感激素的分泌并释放引起机体的厌食反应[34]。
食物进入胃肠道后会被肠道内分泌细胞感应进而释放一系列激素，如胆囊收缩素（CCK）、胰高血糖素样肽1（GLP1）、葡萄糖促胰岛素（GIP）等，用于调节机体营养吸收与食欲。其中，胆囊收缩素是由肠内分泌I细胞分泌的一种饱感激素，具有促进胆囊收缩、胰酶分泌、减缓胃排空和促进饱腹感等生理作用[5]。肠腔内的营养物质，尤其是蛋白和脂质及其降解产物可以诱导CCK分泌，进而刺激胆囊和胰腺释放蛋白水解酶和脂解酶调控胃排空速率,使食物更好的消化[67]。
大豆蛋白质经过胃水解后形成大豆蛋白水解物（SPH）。大豆蛋白水解物是平均肽链长度为2~10的低分子肽混合物（以2~3的短肽为主），还含有少量的游离氨基酸、糖类、无机盐等成分[8]。大豆蛋白水解物必需氨基酸组成与大豆蛋白质完全一样，含量丰富且平衡[9]，能够刺激胃肠道分泌激素。
钙敏感受体（CaSR）是G蛋白偶联受体C家族的一员，在胃G细胞、D细胞[1011]以及十二指肠I细胞中高表达[12]。研究表明，人和啮齿动物胃G细胞上的CaSR可感应阳离子多肽及氨基酸，介导胃泌素的释放[13]；胃壁细胞的CaSR通过感应氨基酸等营养素调控H+K+ATP酶的活性[14]，从而调控胃酸的分泌释放，而且CaSR在I，K和L细胞中活化可以促进CCK等激素的分泌释放。猪上的研究发现，日粮蛋白水平影响胃和小肠CaSR的基因表达，并伴随胃蛋白酶活性、血清胃肠激素浓度的显著变化[1516]。近期研究表明除芳香族氨基酸外的其他氨基酸（如L精氨酸、L亮氨酸等）以及蛋白水解物（肉蛋白、乳清蛋白、酪蛋白水解物）也能够刺激STC1细胞和小鼠小肠分泌CCK、GIP、GLP1和PYY，且在CaSR抑制剂存在条件下，这种促分泌效果消失[1718]。这些研究证明了CaSR在氨基酸及蛋白质降解产物诱导胃肠激素分泌过程中的重要作用。

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