目录
摘要1
Abstract1
一、引言2
二、材料与方法4
1．材料4
1.1植物材料与准备4
1.2菌株和载体4
1.3培养基4
2．方法4
2.1生物信息学分析4
2.2基因克隆4
2.3 miR171b过表达载体的构建5
三、结果与分析 5
1.SmNSP2基因及其编码蛋白的生物信息学分析5
1.1 SmNSP2基因序列分析5
1.2 SmNSP2基因编码蛋白分析7
1.3 SmNSP2氨基酸序列的保守结构域预测7
1.4 SmNSP2蛋白质二级结构的预测8
1.5 SmNSP2基因编码蛋白的三级结构9
1.6 SmNSP2氨基酸序列同源性及系统发育分析10
2. primiR171b的克隆及过表达载体的构建14
2.1 primiR171b的克隆14
2.2 miR171b的过表达载体的构建15
三、讨论16
致谢16
参考文献16
茄子SmNSP2的生物信息学分析与miR171b表达载体的构建
摘要
黄萎病是一种土传植物维管束病害，危害十分严重，会大幅度削减农作物的产量，令经济产生巨大的损失。 microRNA（miRNA）是一类广泛存在于动植物细胞内的非编码RNA序列，长度约为1924个核苷酸。miRNA通过转录后调控的方式负调控基因表达，是植物体内重要的调控因子，参与植物逆境响应和生长发育等生命活动过程。在本实验室前期研究中通过高通量测序，鉴定得到一批响应黄萎病病菌侵染的茄子miRNA，其中miR171b受黄萎病病菌侵染诱导表达，降解组测序发现它的靶基因是SmNSP2，推测miR171b在黄萎病防卫中行使一定的功能。本研究采用生物信息学方法分析了SmNSP2基因的序列、结构、亲缘关系等特征，并构建了miR171b过表达载体。具体结果如下： SmNSP2序列含1485 bp，编码494个氨基酸，其编码的蛋白质具有 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: @351916072@ 
较明显的无规则卷曲结构，其中包含的Pfam结构域在植物菌根化和结瘤方面发挥重要的作用，所以推测SmNSP2能够在响应植物黄萎病调控中行使一定的功能。氨基酸同源序列比对分析表明，有82.55%的氨基酸在位置上保守，且中后部序列保守性较高，并且大部分集中于Leu（亮氨酸）残基。系统发育分析表明，SmNSP2与来自辣椒的NSP2的氨基酸序列具有较高的同源性。这些结果为miR171b的功能和调控机制研究奠定了基础。

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