目录
摘 要 II
关键词 II
ABSTRACT III
KEY WORDS III
引言 1
1 材料与方法 3
1．1 实验材料 3
1．1．1 质粒及菌株 3
1．1．2 仪器 3
1．2 原核表达蛋白及纯化 3
1．2．1 蛋白原核表达 3
1．2．2 检测纯化蛋白 3
1．3 Westernblot检验 3
1．3．1 SDSPAGE凝胶电泳分离蛋白 4
1．3．2 免疫印迹 4
1．4 蛋白脂结合检测 4
1．5 体外磷酸化实验 5
2 结果与分析 5
2．1 PA可与CIPK23和CBL1结合 5
2．2 CIPK23的不同区域与PA的结合效果 6
2．2．1 CIPK23与PA结合的关键氨基酸位点在N端 6
2．2．2 PA抑制CIPK23激酶活性 7
3 讨论 8
致谢 8
参考文献 9
磷脂酸与拟南芥低钾信号转导元件的相互作用关系研究
摘 要
钾离子在植物的生长发育和逆境响应过程中发挥重要作用。钾离子通道AKT1是拟南芥根系吸收钾离子的最主要通道，在低钾胁迫下，AKT1受到多种信号转导元件的复杂调节。其中，钙信号途径CBL1CIPK23对AKT1的激活作用被认为是拟南芥响应低钾胁迫的最主要机制之一。近年来对磷脂酸（PA）的研究表明，它参与了植物对多种逆境胁迫的响应，本研究前期基础表明，低钾条件下，PA含量明显增加，暗示PA可能参与植物响应低钾胁迫下的信号转导过程。为了研究PA信号与AKT1的相互作用关系，本研究以钙感受器蛋白CBL1和它下游的蛋白激酶CIPK23为研究对象，通过硝酸纤维素膜( NC膜)免疫显色法检测PA和它们是否互作。结果表明，CBL1和CIPK23都可以与PA结合，并且CBL1对PA的结合能力更强。通过比较CIPK23不同结构域与PA的结合能力，我们推测CIPK23与PA结合的位点可能位于 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: *351916072* 
该蛋白的N端结构域。此外，将激酶活性中心的三个碱性氨基酸K71/K77/R78突变为PA不能结合的中性氨基酸导致CIPK23与PA的结合能力下降，暗示它们可能是PA的结合位点。本研究还通过体外磷酸化分析，检测到PA处理导致CIPK23对通用底物MBP的磷酸化显著减弱，暗示PA的结合可能抑制了CIPK23的激酶活性。本研究为PA信号参与拟南芥低钾胁迫信号转导提供了初步证据，具体的调节机制还有待进一步研究。

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