目录
摘要 3
关键词 3
ABSTRACT 4
KEY WORDS 4
1 材料与方法 7
1.1. 菌株及质粒 7
1.2. 培养基的配制 7
1.3. 基因敲除 8
1.4. 质粒回补 8
1.5. 蛋白融合技术 8
1.6. 诱导自噬 8
1.7. 荧光检测 9
1.8. GST pulldown 9
1.9. 免疫印迹分析（Western blot） 9
1.10. 免疫共沉淀（coimmunoprecipitation） 9
1.11. 双分子荧光互补（BiFC） 9
1.12. 试剂与仪器 9
2 结果部分 10
2.1. Atg21和Vps34缺失导致自噬缺陷 10
2.2. 双突变体中Atg21和Vps34均回补后恢复正常自噬 11
2.3. Vps21缺失时Atg21和Vps34不能正确定位与互作 12
2.4. 人为使Atg21和Vps34共定位可以部分弥补Vps21缺失造成的自噬缺陷 13
3 讨论 15
3.1 对于课题及实验的思考 15
3.2 课题的创新性 16
3.2 课题未来走向 17
致谢 17
参考文献 17
研究GTPase Vps21调控下的Atg21Vps34蛋白互作对自噬的影响
摘要
所在实验室之前的研究表明，自噬前体封口（phagophore closure）依赖于GTPase Vps21调控下的ESCRT复合体亚基与自噬蛋白的互作，即Vps21至少可以通过介导Snf7和Atg17共定位产生互作，从而利用ESCRT复合体对膜性细胞器的封口功能促进自噬前体封口。然而，Vps21缺失还导致PI3K复合体亚基Vps34和自噬蛋白Atg21不能正确定位和互作，而这二种蛋白都是参与自噬过程的。为了探讨Vps21调控的Vps34和Atg21的定位与互作对自噬过程的影响，本文通过使用GFPGBP *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: @351916072@ 
Nanotrap系统，在vps21∆菌株的染色体上构建ATG21GFP和VPS34GBPmCherry，由于GFP和GBP之间的亲和力，人为地使Atg21和Vps34相互靠近，去了解vps21∆菌株的自噬缺陷能否部分得到恢复。由于疫情无法完成接下来的实验，如果Vps21调控下的Vps34和Atg21的定位与互作对自噬过程非常重要，本文预测与普通的vps21∆菌株相比，该特殊菌株中的自噬过程将得到部分恢复，反之，这种改造将没有作用。实际的结果需要待实验完成后才能确定。

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