丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)是引起输血相关肝炎及慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要病原，其包膜蛋白E2被认为是诱导特异性体液免疫的主要靶点。为研究截短的包膜蛋白E2对小鼠的免疫保护作用，我们构建了表达HCV H77（1a）型和S52（3a）型截短的可溶性包膜蛋白E2（soluble E2, sE2）的果蝇Schneider 2（S2）细胞系，并对表达的蛋白进行了初步鉴定。应用聚合酶链式反应扩增sE2的基因，将其分别插入载体pMT/BiP/V5-HisA，以构建pMT-H77sE2和pMT-S52sE2真核表达载体。应用磷酸钙转染技术将重组质粒瞬转至S2细胞中，诱导表达后，以免疫印迹法检测培养基中的分泌蛋白。采用相同的方法将重组质粒和筛选质粒共转染至S2细胞，通过杀稻瘟菌素反复筛选获得表达sE2蛋白的果蝇S2细胞系，通过免疫印迹法进行初步鉴定。结果表明所表达蛋白分子量正确，成功构建了稳定表达包膜蛋白E2的S2细胞系，并可用于后续的小鼠实验，为抗体的制备，以及HCV疫苗的研究奠定基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言 1
1 材料与方法2
材料 2
1.1.1 表达系统及载体 2
1.1.2 工具酶、试剂盒和细胞培养基 3
1.1.3 试验试剂及相关培养基 3
1.1.4主要设备及仪器 4
1.2方法 4
1.2.1 PCR引物合成与设计4
1.2.2 sE1、sE2真核表达载体的构建5
1.2.3 重组质粒的瞬间转染6
1.2.4 H77及S52 sE2蛋白的Western Blot分析 6
1.2.5表达H77及S52 sE2蛋白的稳转系细胞的筛选7
2 结果与分析7
2.1 H77、S52 sE2目的基因扩增7
2.2载体及目的片段双酶切 7
2.3重组质粒的菌落PCR鉴定8
2.4 重组质粒酶切鉴定8
2.5重组质粒的基因测序9
2.6瞬转S2细胞表达蛋白 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: &351916072& 
的Western Blot 检测9
2.7 S2稳转系细胞蛋白表达的Western Blot 检测9
3讨论 10
致谢11
参考文献12
丙型肝炎病毒H77、S52型截短的包膜蛋白E2在果蝇Schneider 2细胞内的表达及鉴定

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