目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1□材料与方法1
1.1(试验材料 1
1.2(载体构建及转基因研究1
1.2.1□载体构建1
1.2.2□遗传转化菌种制备及转化4
1.2.3□水稻愈伤组织制备6
1.2.4(愈伤组织介导的转化6
1.2.5(转基因苗的鉴定7
1.3(PCR鉴定分析 7
1.3.1□DNA提取7
1.3.2□阳性编辑植株的测序鉴定8
1.4□种子谷蛋白的提取及SDSPAGE电泳分析 9
1.4.1(种子谷蛋白的提取9
1.4.2(胶的配制9
1.4.3□SDSPAGE电泳及后续处理9
2□结果与分析9
2.1□各基因靶位点突变类型分析9
2.2□突变体稻米中谷蛋白含量12
3□讨论 14
致谢14
参考文献15
附录 试剂的配制17
水稻低谷蛋白种质的创制
摘要
本实验通过CRISPR/Cas9技术分别敲除水稻谷蛋白合成相关基因GluB5和GluB1a以及通过RNAi技术对W0868品种和宁粳6号品种的GluA基因进行RNA干扰并从分子层面和表型层面对低谷蛋白性状进行双重鉴定。本实验通过提取水稻叶片DNA、PCR扩增、1%琼脂糖凝胶电泳、测序，从分子层面鉴定是否成功敲除该水稻合成相关基因；继而通过提取水稻种子蛋白，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳从表型层面鉴定水稻谷蛋白含量（谷蛋白前体、谷蛋白酸性亚基、谷蛋白碱性亚基）的变化。结果显示：本试验通过CRISPR/Cas9技术编辑GluB5基因，得到了谷蛋白含量显著下降，醇溶蛋白含量升高的突变体。通过RNAi技术干扰GluA基因，得到了谷蛋白含量显著下降，醇溶蛋白含量升高的突变体。

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