目的 本论文旨在研究建立麦蓝菜多糖中试提取物中多糖的HPLC-ELSD含量测定方法，并对这种方法进行了方法学验证。方法 采用正交设计试验优化麦蓝菜多糖的酸水解预处理方法，并优化建立酸水解样品的HPLC-ELSD含量测定分析方法。结果 HPLC-ELSD分析条件为NH2柱，流动相为H2O:ACN=25:75，鞘气40℃，流量1.6 L/min。测得麦蓝菜多糖中试提取物中的多糖百分含量为80.63%。精密度为RSD 1.86%；平均加样回收率为94.1%；葡萄糖标准曲线线性良好，线性范围为0.2~0.6 mg/mL。结论 HPLC-ELSD含量测定方法具有较高的精密度，良好的专属性、准确性与重现性，可用于麦蓝菜多糖的含量测定。关键词 麦蓝菜多糖，含量测定，HPLC-ELSD，方法学验证
目 录
1 引言 1
1.1 多糖含量测定方法概述 1
1.2 多糖理化性质 1
1.3 多糖的降解 1
1.4 多糖含量测定方法 2
1.5 本文研究的目的与意义 4
2 实验部分 4
2.1 实验仪器 4
2.2 实验设备 4
2.3 实验试剂 4
2.4 HPLCELSD方法 5
2.5 葡萄糖标准曲线的制备 5
2.6 酸水解正交实验 5
2.7 HPLC方法学考察 6
2.8 多糖含量测定 6
3 结果与讨论 7
3.1 HPLCELSD方法优化结果分析 7
3.2 葡萄糖标准曲线 7
3.3 正交实验结果分析 8
3.4 方法学考察结果 8
结论 10
致谢 11
参考文献 12
 引言
多糖(polysaccharide)是重要的天然高分子化合物，是构成生命活动的四大基本物质之一，在生物体中广泛存在。多糖是由多个单糖通过糖苷键连接而成的高聚体[1]，糖苷键由醛糖或酮糖脱水形成，可用通式(C6H10O5)n表示。多糖不仅是生物体不可缺少的成分，还有很多药理作用：抑制肿瘤； *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
抗氧化、辐射作用；活化并增强人体免疫系统，快速调节免疫；润肠通便、调节胃肠功能、降低胆固醇；帮助身体组织结构再生和修复，促进伤口愈合等。正是因为多糖有如此多的有益于生物体的药理作用，近年来人们对多糖的研究也越来越多。但是多糖的结构复杂，种类繁多，存在形式多种多样，多糖的含量测定方法研究一直是多糖研究的重要内容。
多糖含量测定方法概述
多糖的含量测定方法可以分为色谱法和化学法。色谱法包括气相色谱法、高效液相色谱法、薄层色谱法和空间排阻色谱法等；化学法包括3,5二硝基水杨酸法、苯酚硫酸法、蒽酮硫酸法和硫酸咔唑法等。
1.2 多糖理化性质
糖类属于多羟基醛、多羟基酮及其缩聚物和某些衍生物，可分为植物多糖、动物多糖和菌类多糖。植物多糖包含纤维素、淀粉和粘液质，纤维素由D葡萄糖通过β1→4糖苷键聚合而成，淀粉为α1→4或α1→6糖苷键聚合而成的D葡聚糖，粘液质由L古酪糖醛酸与D甘露糖醛酸聚合而成。动物多糖包含肝素、硫酸软骨素、透明质酸和甲壳素。N乙酰氨基己糖和糖醛酸组成的结构单位聚合构成肝素。菌类多糖一般由D葡萄糖通过β1→3糖苷键聚合而成。
多糖与单糖的区别在于无还原性，无变旋现象，无甜味，大多数难溶于水，不溶于有机溶剂，有的可以和水形成胶体溶液。
1.3 多糖的降解
由于多糖是高分子化合物，结构复杂，且往往具有一定的分子量范围，难以获得对照品，给直接测定带来了很大的困难。因此，多糖的含量测定大多需要先将多糖降解成单糖或寡糖后再进行分析。常用的糖降解方法[2] 见下表。其中，最常用的降解方法为酸降解。利用透析、沉淀、中和等手段来消除酸的影响[3]。
表1 多糖常用降解方法
降解方法
仪器与试剂
优越性
缺点
物理法
超声波、辐射
使用试剂少、操作简便、可控性好
成本较高、收率低等
化学法
NaNO2降解、酸降解、氧化降解
反应快、操作简单、水解产率高
污染严重、均一性差
生物法
生物酶
均一性好、特异性
成本高、酶价格昂贵
1.4 多糖含量测定方法
1.4.1 气相色谱法(GC)
气相色谱法是用气体作为流动相，可用氦气、二氧化碳、氢气、氮气等作为流动相，分离或者分析易于挥发而不发生分解的物质的一种分析方法。测试特定化合物的纯度和分离混合物的各种组分(也可以用来测定每个组分的相对含量)等都属于气相色谱的一般用途。在某些情况下，气相色谱法还可以帮助表征化合物。孙莲等[4]用此方法测定新疆桑枝多糖的含量并分析了其单糖组成。
1.4.2 高效液相色谱法（HPLC）
HPLC方法在糖类化合物含量测定分析中有着广泛且重要的应用。最常用的色谱柱为氨基键合硅胶色谱柱， C18和C8色谱柱的应用也有所报道。此方法的流动相通常为乙腈和水，糖的保留时间随水的比例的减少而减少[5]。
HPLC常用的检测器有蒸发光检测器(ELSD)、示差折光检测器(RI)、荧光检测器(FLD)、电化学检测器(ED)、紫外检测器（UV）等。蒸发光检测器(ELSD)具有以下几个特点：价格低、运行成本低、维护费用低、操作简单、其灵敏度高于RI 检测器；示差折光检测器（RI）虽然不需要样品的衍生化反应，稳定性高，操作简单，但不适用于梯度洗脱，检测灵敏度低，并且受温度和流速的影响较大；紫外检测器（UV） 检测器主要用有紫外吸收的非衍生酮糖、醛糖、脱氧糖和二糖等有机物，对样品的检测受吸光数的影响，流动相选择受紫外吸收限制；二级管阵列检测器(PDA)属于紫外可见光检测器；UV和PDA检测器灵敏度远高于ELSD和RI检测器；FLD 可以利用物质的荧光吸收从而实现对物质的检测，其灵敏度高于较以上几种检测器。
1.4.3 薄层色谱法（TLC）
薄层色谱法适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。此方法的固定相有硅胶、硅藻土、氧化铝等，以合适的溶剂为流动相，根据吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离，从而对多糖进行分析。黄驰等[6]通过实验证明多糖的含量测定可以通过葡萄糖的含量作为质量控制标准。

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