目 录
1 绪论 1
1.1 中药枳实研究概况 1
1.1.1 化学成分研究 1
1.1.2 药理作用及临床应用研究 2
1.2 中药挥发油提取方法与鉴定概况 3
1.2.1 提取方法研究进展 3
1.2.2 GC-MS在挥发油成分鉴定中的应用研究进展 4
2 实验 5
2.1 仪器与试药 5
2.2 实验方法 6
2.2.1 枳实挥发油的提取 6
2.2.2 单因素实验 6
2.2.3 正交实验 7
2.2.4 工艺验证实验 7
2.2.5 GC-MS工作条件 7
2.2.6 图谱分析方法 8
2.3 实验结果 8
2.3.1 单因素实验结果 8
2.3.2 正交实验结果 10
2.3.3 工艺验证实验结果 12
2.3.4 GC-MS成分分析结果 12
2.4 讨论 14
结论 15
致谢 16
参考文献 17
1 绪论
枳实为芸香科乔木酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果，主产于四川、江西、福建、江苏等地。分布于华东、华中、华南、西南各省区[1]。枳实是常用的理气药，其性味苦，辛、酸，微寒；具有破气消积，化痰除痞的功效。枳实药材资源比较丰富，临床应用也较广。枳实挥发油作为枳实的主要化学成分，近年来对其主要成分分析研究较多，但对其工艺研究报道较少。枳实挥发油的主要成分是以单 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^3^5`1^9`1^6^0`7^2# 
萜类为主的化合物，主要有a-蒎烯(α-pinene)，β-蒎烯(β-pinene)，月桂烯(myrcene)，樟烯(camphene)，γ-松油烯(γ-terpinene)，柠檬烯(limonene)，芳樟醇等，占挥发油总量的90%以上。其中柠檬烯(limonene)，芳樟醇含量较高，有较高的开发利用价值。本实验采用水蒸气蒸馏法提取枳实挥发油，通过对枳实挥发油的提取工艺进行优化，为枳实挥发油的研究及开发利用提供依据[2,3]。利用GC-MS对获得的挥发油成分进行了分析鉴定，以期为枳实的质量标准提供参考。
1.1 中药枳实研究概况
1.1.1 化学成分研究
(1) 挥发油类成分
廖凤霞等[4]采用水蒸气蒸馏法提取枳实挥发油，利用GC-MS对获得的挥发油进行了分析鉴定，鉴定出15个以单萜为主的化合物，包括α-水茴香萜、α-蒎烯、桧烯、β-蒎烯、β-香叶烯、α-松油烯、柠檬烯、3，7-二甲基-1，3，6-辛三烯、3-异丙基甲苯、γ-松油烯、异松香烯、芳樟醇、4-松油醇、α-松油醇、1，3，3-三甲基-2-乙烯基-环己烯，占挥发油总量的93.81%，柠檬烯、芳樟醇含量较高。
(2) 黄酮类成分
枳实中的黄酮类成分含量较高，约占5%~28%[5]。现已从枳实中分离出来的黄酮类成分主要为橙皮苷、橙皮素、柚皮苷、柚皮素、新橙皮苷、柚皮芸香苷、红橘素、8-四甲氧基黄酮、野漆树苷、忍冬苷等[5,6]，对黄酮类成分的研究主要是以橙皮苷和柚皮苷为指标性成分进行定性定量和提取工艺的研究。曾祖平等[7]以HPLC法测得6批枳实药材中橙皮苷的含量为0.96%~3.87%，柚皮苷的含量为6.90%~9.10%。除用HPLC法外亦可采用毛细管电泳电化学检测法[8]、HPLC-ESI-MS法[9]测定枳实中的黄酮类成分。
(3) 生物碱类成分
枳实中的生物碱成分有辛弗林、N-甲基酪胺、乙酰去甲辛弗林等，为其强心升压的主要有效成分[10]。在提取的过程中，原有的L-辛弗林的生理活性会降低消旋转变为D-辛弗林，可用高效液相色谱结合薄层色谱扫描来测定枳实提取物中辛弗林的含量，此为一种测定中药中旋光对映体含量经济有效的方法[11]。刘振丽等[12]用HPLC法测得枳实中生物碱类成分辛弗林的含量为0.585%~0.676%。以兔血管动脉条的药理活性为追踪指标，中药枳实中有多种生物碱成分，如乙酰去甲辛弗林具有促进血管动脉条活性的作用。不同种类、产地、采收季节及贮存时间影响辛弗林的含量，各类枳实中辛弗林含量依次为：宽皮橘>甜橙>酸橙>香橙>香圆，采购的枳实原料应尽快投入生产，尽量减少存放时间[13]。
1.1.2 药理作用及临床应用研究
(1) 抗休克作用　
低浓度枳实提取液，可浓度依赖性的增大豚鼠心室肌细胞L型钙电流，有促进钙通道开放的作用。高浓度枳实提取液，可抑制心室肌细胞L型钙电流，有抑制钙通道开放的作用[14]。临床应用枳实提取液治疗各种休克，包括急性心肌梗塞心源性休克、感染性休克等均获得较好疗效。
(2) 镇痛作用
枳实的挥发油不但对胃肠平滑肌产生效应，还对大鼠离体肠平滑肌的收缩呈先兴奋后抑制作用，而且可显著减少醋酸引起的小鼠扭体反应次数及自发活动次数，表现了一定程度的镇痛和中枢抑制作用[15]。
(3) 护肝和降血糖作用　
枳实提取物治疗组与糖尿病模型组比较，血糖水平显著降低，谷胱甘肽含量显著增加，谷胱甘肽过氧化物酶活性、丙二醛和NO含量显著降低，超过氧化物歧化酶活性有所增加。光镜下枳实提取物治疗组肝组织细胞损伤较糖尿病组降低，显示具有增强肝脏的抗氧化能力，降低肝细胞损伤作用，同时高剂量时能显著降低血糖[16]。
(4) 抗疲劳的作用
复方枳实合剂(由枳实、青皮、人参等组成)能使小鼠红细胞、血红蛋白升高，增加其载氧能力，有助于ATP的产生，升高乳酸脱氢酶，有利于消除乳酸，降低血氨，清除运动后疲劳。总之，枳实与青皮、人参等配伍后具有抗疲劳、镇痛、耐缺氧的作用[17]。枳实的挥发油不但对胃肠平滑肌产生效应，而且可显著减少醋酸引起的小鼠扭体反应次数及自发活动次数，表现了一定程度的镇痛和中枢抑制作用[15]。
(5) 升压、强心作用　
枳实及其有效成分有升压、强心、利尿和增加心、脑、肾血流量的作用。枳实可使兔主动脉平滑肌收缩，此作用可能与激活平滑肌细胞膜上的肾上腺素α-受体、胆碱能M受体及异搏定敏感钙离子通道有关，并对胞外钙离子有一定的依赖性；与平滑肌细胞膜上的组胺H1受体无关。升血压成分主要为生物碱类成分辛弗林、N-甲基酪胺、γ-氨基丁酸、乙酰去甲辛弗林。辛弗林直接作用于肾上腺素能受体，N-甲基酪胺则主要通过释放体内儿茶酚胺的间接机制发挥作用；γ-氨基丁酸为神经递质，与多种脑神经疾病有关，乙酰去甲辛弗林已知存在于暗螂的脑神经中，但二者的升压药理作用尚待研究[18]。
计算公式为：挥发油得率(%)=挥发油体积(mL)/样品质量(g)
2.2.2 单因素实验
(1) 浸泡时间对挥发油得率的影响
准确称取5份过60目筛的100g枳实粉末，分别浸泡0h，6h，12h，18h，24h，在加水倍量8倍，提取时间5h的条件下加热提取挥发油。停止提取，去除下部蒸馏水，得到粗提取物，然后加适量无水硫酸钠，去除粗提取物中掺杂的水分，用离心机分离无水硫酸钠与挥发油，量取枳实挥发油。

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