本试验旨在研究L-精氨酸（L-Arg）对湖羊子宫内膜上皮细胞抗氧化能力和细胞增殖活力的影响。饲养试验对湖羊限饲或补充L-Arg处理，ELISA方法检测MDA、GSH/GSSG水平变化，抗氧化酶CAT和SOD2活力变化；细胞计数试剂盒检测不同浓度H2O2和L-Arg（200 μM）处理对细胞增殖活力的影响；活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）水平；RT-qPCR检测CAT和SOD2基因表达变化。结果显示限饲使子宫内膜氧化应激指标（MDA、GSH/GSSG、CAT和SOD2）发生显著变化，补充L-Arg缓解了该现象；细胞试验结果与之一致L-Arg能缓解H2O2引起的细胞增殖活力的影响，缓解H2O2诱导的ROS的生成及SOD2基因表达变化。总之，本研究发现补充L-Arg能缓解短期限饲导致的湖羊子宫氧化应激；L-Arg能缓解H2O2对子宫内膜上皮细胞的抗氧化能力和增殖活力的影响。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1 材料与方法4
实验材料准备 4
1.1.1 材料4
1.1.2 样品采集4
1.1.3湖羊子宫内膜上皮细胞的分离培养5
1.2 ELISA方法检测MDA、GSH/GSSG水平变化，抗氧化酶CAT和SOD2的活力变化5
1.3 H2O2诱导子宫内膜上皮细胞氧化应激模型的建立 5
1.4细胞培养 5
1.5 ROS超氧化物含量测定 6
1.6 检测抗氧化酶基因CAT和SOD2表达的变化 6
1.6.1 总RNA提取与反转录6
1.6.2实时荧光定量PCR检测6
1.7 统计分析 7
2 结果与分析7
2.1 限饲和补充LArg对子宫内膜组织氧化抗氧化的影响7
2.2 不同浓度H2O2处理对湖羊子宫内膜上皮细胞增殖活力的影响7
2.3 H2O2和LArg处理对湖羊子宫内膜上皮细胞增殖活力的影响8
2.4 H2O2和LArg处理对湖羊子宫内膜上皮细胞活性氧水平的影响8
2.5 H2O *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: #351916072# 
2和LArg处理对湖羊子宫内膜上皮细胞CAT和SOD2基因表达的影响9
3 讨论 9
致谢10
参考文献11
精氨酸对湖羊子宫内膜上皮细胞氧化抗氧化水平的影响
引言
引言 养羊业在我国畜牧产业中占有十分重要的地位，但是我国多数绵羊品种繁殖性能较低，严重制约了养羊产业的发展，因此充分发挥多羔绵羊的繁殖优势对养羊业效益的提高和产业的发展有重大意义。湖羊在我国有着悠久的养殖历史，是世界闻名的多羔绵羊品种，拥有优良的遗传性能和生产性能，具有耐粗饲、性成熟早和繁殖率高等特点。近年来湖羊被我国许多地区引入，但受到气候条件、饲养条件等因素的影响，湖羊的生殖优势没有得到充分的发挥[1]。营养水平是调控哺乳动物繁殖性能的重要因素[2]。营养失调会扰乱动物生殖系统的内分泌稳态，进而影响动物的繁殖性能[3]。繁殖过程中营养不足会导致子宫功能障碍[4]。近期研究发现，短期限饲会造成湖羊卵巢氧化应激，影响绵羊卵泡的正常发育和发情周期[5]。LArg是一种在动物体内具有多种生理功能的重要氨基酸[6]，可对机体生理生化活动进行调节[7]。先前的研究表明，补充LArg可以调节妊娠子宫的新陈代谢，提高子宫和胎盘的抗氧化能力[8]，改善怀孕绵羊的生产性能[9,10]。氧化应激会影响哺乳动物机体正常机能的发挥[11]，是很多疾病的诱因[12,13]。 H2O2是一种常见的氧化应激诱导剂[14]，可用于建立子宫内膜上皮细胞氧化应激模型[15]。活性氧(reactive oxygen species，ROS)是动物繁殖过程中代谢的副产物，细胞内的活性氧水平可以反映细胞的氧化应激水平。过氧化氢酶(CAT) 在哺乳动物组织中普遍存在，可以催化多种反应，具有消除H2O2、胺类和酚类毒性等多种作用。超氧化物歧化酶(SOD) 也是哺乳动物体内重要的抗氧化酶，可以消除生物体在新陈代谢过程中产生的氧自由基等有害物质。抗氧化酶CAT和SOD在保护机体免受氧化应激损伤中起着重要的作用。CAT、SOD2、丙二醛（MDA）和还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽（GSH/GSSG）水平等是检测氧化应激的关键指标，多种因素对生物生理生化过程的影响可以通过生物体内这四者的水平表现出来。本课题分为饲养试验和体外细胞培养试验两部分。饲养试验通过对湖羊进行同期发情，分组进行限饲或补充LArg处理，在湖羊发情时屠宰采集子宫内膜组织样本进行RTqPCR检测抗氧化酶基因CAT和SOD2的表达，利用ELISA方法检测MDA、GSH/GSSG水平变化，抗氧化酶CAT和SOD2的活力变化，进而探究限饲和补充LArg对湖羊子宫内膜抗氧化水平的影响。体外细胞培养试验，将湖羊子宫内膜上皮细胞分组进行以下处理：1）NC + DPBS；2）NC + H2O2（200 μM）;3）NC + LArg（200 μM）;4) NC + H2O2（200 μM） + LArg（200 μM），使用H2O2和LArg处理子宫内膜上皮细胞，收集细胞和上清，通过细胞计数试剂盒、活性氧检测试剂盒和RTqPCR方法等测定相关氧化应激指标及细胞增殖活力水平，探究H2O2和LArg处理对湖羊子宫内膜上皮细胞抗氧化水平和增殖活力的影响。通过本课题，有望初步说明LArg对湖羊子宫内膜抗氧化水平的影响与机制，为通过调节营养来改善绵羊子宫生理活动提供理论依据。
1 材料与方法
1．1 实验材料准备
1．1．1 材料
DPBS、基础培养液DMEM/F12、1640培养基(不含LArg)、胎牛血清（FBS）、双抗购自Gibco公司，活性氧检测试剂盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）购自凯基生物科技有限公司，增强型CCK8试剂盒购自碧云天生物科技有限公司，qRTPCR检测试剂购自南京诺维赞，引物购自擎科生物科技有限公司。
1．1．2 样品采集

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