[目的]本文旨在鉴定RABV感染宿主细胞引起的circRNA表达差异及筛选调控RABV复制的功能性circRNA。[方法]通过生物信息学软件对RABV感染SK-N-SH细胞后circRNA差异表达谱进行分析，RT-qPCR方法对差异表达的circRNA进行验证，RT-qPCR和Western blot检测过表达circRNA对RABV复制的影响。[结果] RT-qPCR验证3条circRNA的差异表达显著，且变化趋势与RABV感染引起的circRNA差异表达谱情况一致。过表达circRNA（circ-59），qPCR和Western blot检测发现 RABV N蛋白的mRNA水平和蛋白表达水平均下调，说明circRNA（circ-59）抑制RABV的复制。[结论] RT-qPCR方法验证了3条circRNA的表达情况与RABV感染SK-N-SH细胞后circRNA差异表达谱情况一致，证明RABV感染宿主细胞后引起部分circRNA相对表达水平确有差异。通过过表达circRNA抑制RABV复制的功能性circRNA（circ-59）。本研究为深入了解RABV与宿主circRNA的相互作用，揭示RABV的致病机制奠定了基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
材料 2
实验仪器与耗材2
1.1.2 引物序列3
1.1.3 细胞3
1.1.4 毒株3
1.1.5 抗体3
1.2 方法 3
1.2.1 细胞培养与病毒繁殖3
1.2.2 病毒滴度测定3
1.2.3 细胞感染实验4
1.2.4 提取总RNA4
1.2.5 RTqPCR验证差异表达circRNA4
1.2.6 构建circRNA过表达载体5
1.2.7 circRNA对病毒复制的影响6
2 结果6
2.1 病毒滴度测定6
2.2 RTqPCR验证差异表达的circRNA6
2.3 *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^351916072^ 
circRNA过表达载体的构建7
2.4 RABV诱导差异表达的circRNA的功能预测7
3 讨论 8
致谢10
参考文献11
调控狂犬病毒复制的功能性环状RNA筛选
动物医学 郇春燕
引言
狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies virus，RABV）感染哺乳动物中枢神经系统引起的一种人畜共患病，一旦出现临床症状，死亡率高达100％。每年有约59,000人死于狂犬病，其中95％的病例发生在非洲和亚洲。中国的人狂犬病感染病例仅次于印度，位于亚洲第二位[1]。狂犬病是迄今为止人类历史上死亡率最高的急性传染病，目前仍无任何治疗措施。环状RNA(circularRNA，circRNA)是一类内源性非编码RNA，不存在5和3端，为共价键形成的闭合环形结构RNA分子，对RNA外切酶具有抗性，表达稳定而不易降解[2]。尽管很早就发现了circRNA，但认为它们没有生物学功能。然而，随着RNA深度测序技术和生物信息学的发展，已经报道了很多circRNA表现出各种不同的生物学功能。近几年研究发现circRNA在肿瘤和病毒感染中具有重要作用[3]，成为非编码RNA领域研究的新热点。在RABV研究领域，已有关于细胞感染RABV后mRNA、微小RNA（miRNA）以及长链非编码RNA（lncRNA）的研究，表明非编码RNA在RABV致病机制及作为治疗靶标研究上可能具有重要价值[4]。但是，关于circRNA是否调控RABV感染的研究仍无相关报道，circRNA调控RABV感染的具体机制值得进一步探究。前期，我们研究团队发现RABV感染SKNSH细胞后引起circRNA的差异表达，并用生物信息学软件分析获得circRNA的差异表达图谱。在此基础上，本课题进一步对获得的circRNA差异表达图谱进行鉴定，通过过表达circRNA检测其对RABV复制的影响，以期获得调控RABV复制的功能型circRNA。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验仪器与耗材 本实验使用的仪器设备及来源如表11所示，试剂及耗材来源如表12所示。
表11 仪器设备
Table 11 Equipments
仪器设备
厂家
二氧化碳恒温培养箱
Thermo
低温高速离心机
Eppendorf
常温高速离心机
Eppendorf
超净台
Thermo
旋涡震荡器
Scientific Industries
移液器
Eppendorf
超低温冰箱
Eppendorf
Realtime PCR仪
Roche
PCR仪
Eppendorf
凝胶成像系统
BioRad
多功能成像仪（Western Blot)
GE
表12 试剂及耗材
Table 12 Reagents and consumables
名称
厂家
MEM液体
HYCLONE
DMEM液体
HYCLONE
0.25%胰酶
AMRESCO
Trizol
TaKaRa
胎牛血清
Gibco
96孔板
JET
12孔板
JET
6孔板
JET
反转录试剂盒
TOYOBO
细胞瓶
JET
培养皿
THERMO
离心管
THERMO

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