目前关于猪伪狂犬疫苗保护剂的研究还比较少，疫苗公司在获取PRV病毒原料后要放到冰柜保存备用，工厂用的冰柜多为-20℃，而PRV在-18℃—-25℃会逐渐失去活性，故需要设计一种保护剂来提高PRV原料在-20℃的耐冻性能。为筛选出可以使猪伪狂犬疫苗在-20℃可以长期保存而疫苗效价不损失过多的配方，需要配置不同成分的病毒稳定剂与PRV疫苗混合后，置于-20℃保存，每隔七天测定一次效价，通过观察疫苗效价的损失以找到符合要求的保护剂配方，为以后研究更加符合需求的猪伪狂犬疫苗冻干保护剂提供一定的参考。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1试验材料2
1.1材料 2
1.1.1 保护剂的分类及其保护作用机理2
1.2 猪伪狂犬病毒液的制备2
1.3 猪伪狂犬稳定剂制备方法2
1.4 保护剂配制的注意事项 2
1.5 耗材3
1.6 耐热保护剂的灭菌3
2方法与内容3
2．1 繁殖猪伪狂犬病病毒 3
2．1．1 细胞的复苏与传代3
2．1．2 病毒的接种3
2．1．3 收获病毒 3
2．1．4 病毒滴度的检测4
2．2 细胞传代 4
2．3 细胞铺板 4
2．4 效价的测定 4
3结果与分析4
4讨论6
致谢7
参考文献7
猪伪狂犬疫苗液体保护剂筛选研究
引言
引言：生产PRV疫苗的公司在获取PRV病毒原料后多置于20℃冰柜中保存备用，而PRV病毒在此温度条件下会产生活性损失。为了解决猪伪狂犬活疫苗在20摄氏度冷冻保存时的活性损失问题，试验选用羟丙甲纤维素、PF68、吐温80、PEG系列产品、PF127、丝肽粉等成分，按照不同浓度设计病毒稳定剂，与PRV1:1混合，模拟冷藏条件，将混合后的样品放置20℃保存，测定不同保存期的TCID50。
1 试验材料
1．1 材料
毒株：Bartha *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
k61；ST细胞（10%DMEM培养）：国家兽用生物制品工程研究中心提供；试剂：羟丙甲纤维素、BSA、PF68、PF127、吐温20、吐温80、PEG200、PEG400、PEG2000、PEG4000、PEG6000、PEG8000、丝肽粉、PVPK30、α甲基葡萄糖苷、麦芽糖醇、乳糖、麦芽糖。
1．1．1 保护剂的分类及其保护作用原理
1．2 猪伪狂犬病毒液的制备
取猪伪狂犬的病毒样本，用2%DMEM做100倍稀释，接种ST,37 ℃培养培养48h后，收获病毒液，并反复冻融两次后，三层纱布过滤，收获上清，作为猪伪狂犬病毒液。
1．3 猪伪狂犬稳定剂制备方法
稳定剂与PRV1:1混合后放置于20℃冰箱。
1．4 保护剂配制的注意事项
样品配制是需要选择合适的缓冲剂，本实验各成分溶于超纯水后，以2mol/L的KOH和HCL调节PH至7.27.5。准确按计划浓度计算出的量称取保护剂成分加入精确量取的超纯水。配制操作至少要由两个人共同协作完成，避免出现差错。配置完的溶液要充分地混匀，不好混匀的可以辅助使用磁力搅拌器。
表1：各保护剂配方的浓度及PH值
Table 1：Concentration and pH of each protective agent formulation
配方成分
PH值
单一配方
与PRV1:1混合
10%蔗糖
6
7.5
10%海藻糖
6.06.5
7.58.0
5%D70
6
7.5
5%D40
5.56.0
7.07.5
5%α甲基葡萄糖苷
6
7.5
5%麦芽糖醇
6
7.6
10%葡萄糖
6.06.5
7.2
10%乳糖
5.56.0
7.1
10%麦芽糖
6.06.5
7.5
5%PEG200
6.5
7.7
5%PEG400
6.06.5
7.5
5%PEG2000
6.5
7.7
5%PEG4000
6
7.57.7
5%PEG6000
6.5
7.57.7
5%PEG8000
6.06.5
7.27.5
2%丝肽粉
5.5
7
2%PVPK30
6.5
7.7
1%PF127
6.06.5
7
2%PF127
6.5
6.77
1．5 耗材
青瓶(5ml)、丁基胶塞、10ml移液管、试剂瓶、96孔细胞板、0.22μm滤器、1.5mlEP管、EP管架、移液枪、高压灭菌枪头、血清、0.2%胰酶、双抗等。
1．6 耐热保护剂的灭菌
样品在配制完成并充分混匀后，需要进行灭菌。实验室样品灭菌分为高压灭菌和过滤灭菌。高压灭菌适用于大分子物质，灭菌标准为设置121℃20min进行灭菌 ，要注意的是容器装量应约为瓶子容量的三分之一到一半之间，这样可以保证温度的上升和下降比较快速。而小分子的物质如实验中的丝肽粉的灭菌常在超净台中使用专门的0.22μm型的滤器进行灭菌操作。

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