急性低温应激后吉富罗非鱼幼鱼肝脏抗氧化与血清免疫指标的变化
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 实验用鱼 2
1.2 低温应激设计 2
1.3 样品分析2
1.4 测定指标与方法2
1.4.1 肝脏抗氧化指标的测定2
1.4.2 血清免疫指标的测定2
1.5 数据处理2
2 结果与分析3
2.1 肝脏抗氧化指标的变化 3
2.2 血清免疫指标的变化 6
3 讨论 7
3.1 急性低温应激对吉富罗非鱼抗氧化指标的影响 7
3.2 急性低温应激对吉富罗非鱼血清免疫指标的影响8
致谢9
参考文献9
急性低温应激后吉富罗非鱼幼鱼肝脏抗氧化与血清免疫指标的变化
引言
引言：在集约化养殖中，鱼类经常会应对各种胁迫，产生环境应激。环境应激能引起鱼体产生短期内机体平衡调节[1]，从而导致生理上的变化。低温应激会造成的鱼类生理变化，首先是神经内分泌调节和免疫。低温可以调节改变鱼类血液中儿茶酚胺和皮质醇、肾上腺素、去肾上腺素和肾上腺素激动剂的含量[2]，进而抑制白细胞的噬菌作用和抗体水平，即低温导致了鱼体免疫力的下降，最终导致鱼类患病死亡[3]。其次，是渗透压调节。低温可以使得莫桑比克罗非鱼的血浆中钠、氯等离子浓度和渗透压下降，结合高盐度可以使莫桑比克罗非鱼的渗透压调节失败 ，导致莫桑比克罗非鱼冬季大量死亡。
吉富罗非鱼（GIFT，Oreochromis n *51今日免费论文网|www.jxszl.com +Q: ^351916072^
iloticus)属鲈形目（Perciformes）丽鱼科(Cichlidae)罗非鱼属(Tilapia)，属于热带暖水性鱼类，适宜在一年中水温较高的季节生长，适宜生长温度为2035℃，其低温耐受能力比较弱，冬季严寒天气常常造成养殖生产上大量死亡。低温应激是鱼类养殖过程中经常面临的问题，人们一直在寻求有效的方法减轻低温应激对水产养殖所带来的危害。
血清皮质醇水平的变化可以作为鱼类应激状态下的重要指标，急性低温应激下血清皮质醇水平显著上升。血清中的一些特殊血清蛋白，如溶菌酶和补体等，随着应激时间的延长，呈现明显的免疫抑制作用。如强俊等[4]报道，将吉富罗非鱼从26℃直接放入16℃环境下进行急性低温应激，2h后血清溶菌酶活力呈上升趋势，24h后显著下降。Ndong等[5]和Tort 等[6]在莫桑比克罗非鱼（O. mossambicus）和乌颊鱼（Sparus aurata）的研究中也发现，随着低温应激时间的延长，血清溶菌酶活力显著下降。鱼体内存在抗氧化防护体系，正常生理代谢会不断产生活性氧，少量的活性氧自由基是机体必需的，但过量的自由基对机体产生氧化应激，损坏机体的蛋白质、核酸与膜脂，这时就需要生物体内抗氧化防护体系清除过多的自由基[7]。超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）和过氧化氢酶（catalase，CAT）是生物体内主要抗氧化酶，可清除自由基保护机体免受氧化损伤，在维持细胞和机体正常的生理活动方面发挥重要作用。
到目前为止，多数报道有关于环境应激对鱼类血液生化及神经内分泌、免疫指标影响，而对于环境应激尤其是低温下鱼类的抗氧化、抗应激等方面的研究较少，因此，本实验旨在探讨低温应激后吉富罗非鱼幼鱼肝脏抗氧化与血清免疫指标的变化，了解罗非鱼抵抗低温应激的生理代谢机制，为提高罗非鱼越冬存活率提供科学依据。
1 材料与方法
1．1 实验用鱼
实验用吉富罗非鱼取自中国水产科学研究院淡水渔业研究中心宜兴实验基地，实验鱼均重为5.85±0.16g，运回实验室后置于水循环养殖系统中。实验前投喂自制饲料（蛋白29.36%，脂肪7.28%),喂养8周后，选取规格一致，均重为62.26±0.90g的实验鱼20尾，分别置于三个1000L养殖桶中。低温应激实验在无锡渔业学院养殖室可控温循环水族系统中进行。
1．2 低温应激设计
实验设置3组平行，每个平行20尾实验鱼，置于一个养殖桶中。实验开始前鱼禁食24h，再从水温为27℃的桶中选取20条规格一致的鱼转入水温为14℃的3个养殖桶中，进行急性低温应激实验。期间，用自动控温系统将水温控制在14±0.5℃，不投喂，保证溶氧充足，尽量减少人为干扰。
1．3 样品分析
分别于0、6、24、72、144h进行采样。采样时，每个养殖桶随机抽取3尾鱼，将鱼捞起后，用200mg/L的MS222作快速深度麻醉，尾静脉采血，血样于4℃冰箱中静置2h，在4℃，3500g离心10min制备血清，上清液移置80℃冰箱中保存备用，并取适量的头肾用液氮速冻后，于80℃保存，用于分子生物学分析。
1．4 测定指标与方法
1．4．1 肝脏抗氧化指标的测定 肝脏样品解冻后,用预冷生理盐水冲洗, 滤纸吸干水分后称重, 加入4倍体积(W/V) 预冷生理盐水研磨制作匀浆, 肝脏SOD、CAT、GSH和GSHPx的活性与MDA含量测定采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒，按照试剂盒中的说明制备粗酶液。粗酶液置于4℃保存，在24h内测定完毕。
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