产仔数是猪的一个重要的经济性状，提高产仔数可以增加经济效益。然而产仔数受多基因调控，利用传统选育方法育种进展缓慢，分子标记辅助选育方法在育种上的应用，能缩短选育世代，提高育种效率。前期研究发现，8号染色体上的g.33831907位点（Sscrofa10.2版本）与二花脸猪产仔数极显著相关(P＜0.01)，但是否与沙乌头猪和苏太猪的产仔数相关还未知。本试验分析了g.33831907位点多态性与沙乌头猪、苏太猪产仔数的关联性，以期鉴别g.33831907位点是否能作为产仔数分子选育的标记。根据基因位点分型的结果可知，8号染色体g.33831907位点CT、CC和TT基因型在沙乌头猪上的频率分别为0.422，0.433，0.145，在苏太猪上的频率分别为0.319，0.634，0.047。关联性分析结果表明8号染色体g.33831907位点均未证明能显著影响沙乌头猪和苏太猪的产仔数。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 试验材料 2
1.2 试验方法 2
1.2.1 样品DNA稀释液的制备2
1.2.2 利用NCBI设计目标位点的引物3
1.2.3 凝胶电泳试剂的制备与电泳步骤3
1.2.4 目的片段PCR扩增3
1.2.5 凝胶电泳检测PCR扩增产物3
1.2.6 目的片段DNA测序3
1.2.7 基因位点分型3
1.2.8 g.33831907位点基因型与表型的关联性分析3
2 结果与分析4
2.1 凝胶电泳检测PCR扩增产物的结果4
2.2 g.33831907位点在沙乌头猪、苏太猪群体中的分型结果4
2.3 产仔数关联性分析结果4
2.3.1 g.33831907位点多态性与沙乌头猪产仔数关联性分析4
2.3.2 g.33831907位点多态性与苏太猪产仔数关联性分析5
3 讨论6
3.1 g.33831907位点与产仔数不显著相关的原因7
3.2 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: #351916072# 
扩大群体进一步验证该位点的可靠性7
3.3 挖掘影响产仔数的其他基因位点7
4 总结7
致谢7
参考文献8
猪8号染色体g.33831907位点多态性与沙乌头猪、苏太猪产仔数的关联性分析
引言
沙乌头猪是原产于江苏启东市，具有繁殖性能好、抗病力强、生长发育较好、耐粗饲、肉质鲜美独特等优良特性的地方猪品种[1,2]。苏太猪是以原太湖猪为母本、杜洛克为父本培育的猪品种[3]，具有生长速度快、杂种优势显著、瘦肉率高等特点，又具有原太湖猪的高繁殖性能、适应性强、肉质鲜美等优点，是生产商品瘦肉型猪理想的母本之一[4]。
中国的地方猪品种的产仔性能普遍比较高，这是世界公认的。然而进入21世纪以来，国外经过系统的育种，引入外血缘，培育出的猪品种繁殖性能已经能赶上甚至超过我国的地方猪种[5,6]。目前沙乌头猪、苏太猪两个品种因群体数量少并且产仔数存在分离和退化现象，因此对沙乌头猪、苏太猪进行选育提高其产仔数尤为必要。产仔数是猪的一个重要的经济性状之一，提高产仔数可以增加商品肉猪的出栏量，提高猪肉的产量，增加经济效益。产仔数的遗传力比较低（0.1左右），受多基因控制，利用传统的选育方法进行选育进展缓慢。因此，利用分子标记辅助选育方法进行选育能缩短选育世代间隔，加快沙乌头猪、苏太猪产仔性能的选育进展。
1 材料与方法
1．1 试验材料
本研究的试验材料猪耳组织样品采集于两个不同的猪场，其中90头沙乌头猪来自于海门兴旺沙乌头猪保种场，191头苏太猪来自于苏州苏太企业有限公司猪场。猪耳组织样品采集后装入含70%酒精的2ml离心管，利用冰盒送回实验室，置于20℃冰箱内保存备用。采集耳组织样品过程规范，耳组织样品与耳号相对应，离心管标记准确，从两个猪场获得的母猪繁殖记录、系谱完整可靠。PCR Mix由南京擎科生物公司提供。提取耳组织样品DNA的试剂盒采购于天根生化科技（北京）有限公司。其他试验器材由本实验室自备。
1．2 试验方法
1．2．1 样品DNA稀释液的制备
提取耳组织样品的DNA，并稀释到需要的浓度，步骤如下：
(1)剪取0.5×0.5cm大小的耳组织样，放入2 mL离心管中剪碎；
(2)加入缓冲液GA 200μL、蛋白酶K溶液 20μL（20 mg/mL），充分混匀；
(3)混合样品置于56℃烘箱中裂解过夜(12小时)，至管中无组织块为止；
(4)加入200μL缓冲液GB，充分颠倒混匀，置于70℃烘箱中10 min，至溶液清亮，4℃，12000 r/sec离心1 min；
(5)加入200μL无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，4℃，12000 r/sec离心1 min；
(6)将上一步得到的溶液和絮状沉淀完全倒入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），4℃，12000 r/sec离心30 sec，倒掉收集管中废液，吸附柱CB3放回收集管；
(7)向吸附柱CB3中加入500μL漂洗液GD（漂洗液GD中先加无水乙醇），4℃，12000 r/sec离心30sec，倒掉收集管中废液，吸附柱CB3放回收集管中；
(8)向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW（漂洗液PW中先加无水乙醇），4℃，12000 r/sec离心30sec，倒掉收集管中废液，吸附柱CB3放回收集管中；
(9)重复上一步；
(10)将吸附柱CB3放回收集管中，4℃，12000 r/sec离心2min，倒掉收集管中废液，将吸附柱CB3置于干净纸巾上，室温放置数分钟至彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；
(11)将吸附柱CB3放入干净的离心管中，向吸附膜中间部位悬空滴加100μL洗脱缓冲液TE，室温放置25分钟，4℃，12000 r/sec离心2min，将溶液收集到离心管中；
(12)经过Nanodrop2000分光光度计检测质量与浓度后，加入适量的洗脱缓冲液TE，将DNA原液统一稀释到30 ng/μL，DNA稀释液保存至20℃环境的冰箱中，以备后续试验使用。
1．2．2 利用NCBI设计目标位点的引物
从NCBI网站下载目的片段的碱基序列，并利用NCBI（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）中的PrimerBLAST模块对g.33831907位点进行引物设计，设计出能够特异扩增出包含该位点的DNA短片段。目的片段长度为797 bp，上游引物序列为FTGGACACGGGAAAATAAGGGG，下游引物序列RAAAACACGCTCTGGGGTCTT。引物由南京擎科生物公司合成。

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